للبدء في تلقيح 2 مليون خلية pan02 في 12 ملليلتر من DMEM ، واحتضانها عند 37 درجة مئوية و 95٪ رطوبة و 5٪ ثاني أكسيد الكربون و 35٪ هواء. بعد 48 ساعة الطرد المركزي الثقافة في 28 غرام لمدة 2 دقيقة وتجاهل طاف. إصلاح الخلايا عن طريق إضافة 1 ملليلتر من 2.5 ٪ جلوتارالدهيد في أنابيب الطرد المركزي الصغيرة 1.5 ملليلتر بين عشية وضحاها عند 4 درجات مئوية.
في اليوم التالي ، قم بطرد العينات عند 1006 جم لمدة خمس دقائق واستنشق المثبت قبل شطف العينة مرتين باستخدام 0.1 وحدة حسابية PBS. بعد ذلك ، شطف العينات مرتين بالماء المقطر المزدوج لمدة 10 دقائق لكل منهما. بعد ذلك ، أضف محلول 50 ميكرولتر من رابع أكسيد الأوزميوم 1٪ و 1.5٪ فيروسيانيد البوتاسيوم بنسبة 1 إلى 1 واحتضان عند 4 درجات مئوية لمدة ساعة واحدة.
أجهزة الطرد المركزي وشطف العينات مرتين مع 0.1 مولار PBS ومرة واحدة بالماء المقطر المزدوج. ثم أضف 1 ملليلتر من 1٪ ثيوكاربوهيدرازيد واحتضانه في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 إلى 60 دقيقة. بعد الحضانة أجهزة الطرد المركزي والتخلص من الطافية قبل شطف العينات 4 مرات بالماء المقطر المزدوج.
بعد ذلك ، أضف 50 ميكرولترا من رابع أكسيد الأوزميوم 1٪ واتركه ثابتا في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة. أجهزة الطرد المركزي مرة أخرى وشطف العينات 4 مرات بالماء المقطر المزدوج. أضف 1 ملليلتر من 2٪ أسيتات يورانيل واتركه يتلطخ عند 4 درجات مئوية طوال الليل.
بعد شطف العينات بالماء المقطر المزدوج ، أضف 1 ملليلتر من محلول والتون واحتضانها عند 60 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة. بعد الحضانة شطف الخلايا 4 مرات بالماء المقطر المزدوج قبل الجفاف في سلسلة الإيثانول متدرج لمدة 10 دقائق لكل منهما. ثم يجفف مرتين في ملليلتر واحد من الأسيتون 100٪ لمدة 10 دقائق لكل منهما.
بعد ذلك ، امزج 200 ميكرولتر من الأسيتون مع راتنجات الايبوكسي Pon 812 بنسبة 3 إلى 1 و 1 إلى 1 و 1 إلى 3. ونقع العينات في الراتنج في درجة حرارة الغرفة لمدة 2 و 4 و 4 ساعات على التوالي بعد الحضانة المعنية ، قم بتشريب العينات طوال الليل في راتنجات الايبوكسي 100٪ Pon 812. في اليوم التالي ، انقل العينات إلى قالب تضمين مسطح وقم ببلمرتها في فرن عند 60 درجة مئوية لمدة 48 ساعة.
بعد البلمرة ، باستخدام ميكروتوم فائق ، اجمع شرائح شرائح متسلسلة بسمك 70 نانومتر على رقائق السيليكون المتحللة وجففها في فرن 60 درجة مئوية لمدة 10 دقائق.
