Gastric Fluid Sampling, DNA Extraction, and qPCR for H. pylori Detection and its Antibiotic Resistance

للبدء ، اطلب من المريض الصيام طوال الليل قبل جمع العينات. في اليوم التالي ، افتح مجموعة اختبار السلسلة. خذ الكبسولة وأمسك الحلقة في نهاية السلسلة.

قم بلصق الخيط على خد المريض. ثم قم بتوجيه المريض لوضع الكبسولة على لسانه بالقرب من مؤخرة الحلق وابتلاعها مع رشفة من الماء. بعد إذابة الكبسولة في معدة المريض لمدة ساعة ، اطلب من مساعد مدرب سحب الخيط بعناية من المريض.

بعد ذلك ، ضع الطرف المنقوع في سائل المعدة في محلول حفظ عينة TSE وقطع الطرف السفلي من الخيط. ضع العينة الموسومة التي تحمل أنابيب التجميع على رف أنبوب اختبار ودوامة لمدة 10 ثوان. اقلب صفيحة البئر 32 رأسا على عقب عدة مرات لإعادة تعليق الخرزات المغناطيسية ، الدوامة لمدة 10 ثوان.

ثم قم بإزالة سقف رقائق الألومنيوم بعناية من اللوحة. نقل 200 ميكرولتر من سائل المعدة من كل عينة والحمض النووي هيليكوباكتر بيلوري كعنصر تحكم إيجابي في الآبار المنفصلة. ضع لوحة البئر 32 في فتحة العينة المقابلة لآلة استخراج الحمض النووي لاستخراج الحمض النووي التلقائي ، بعد استخراج الحمض النووي وتأكيده.

ضع السائل المعدي الزائد وعينات الحمض النووي المستخرجة عند 20 درجة مئوية تحت الصفر حتى الاستخدام ، قم بإذابة خليط تفاعل qPCR على الثلج واخلطه عن طريق النقر والتدوير لتجنب فقدان الكاشف لكل عينة في صفيحة بئر 32 ، امزج 20 ميكرولترا من خليط تفاعل تفاعل PCR مع البادئات الأمامية والعكسية لليوريا ، مسبار اليوريا وخمسة ميكرولتر من الحمض النووي المستخرج. ضع اللوحة على آلة qPCR واضبط برنامج التدوير الحراري. اضبط اكتساب إشارة الفلورسنت على FAM للحصول على البيانات ، إلى فترة تمديد التضخيم وابدأ التشغيل ، عند الانتهاء من التفاعل.

احفظ البيانات للتحليل. قم بتحليل البيانات باستخدام برنامج متخصص ل qPCR حيث تقوم الأداة تلقائيا بتحديد عتبات خط الأساس. إذا كانت نتائج الاختبار ل h.

البواب إيجابي استبدال مجموعة الكاشف بكواشف الكشف عن جين 23S rRNA وطفرة جينية gyrA في مجموعة h. pylori وبدء اختبار مقاومة الأدوية على العينة. تظهر هذه الدراسة الكشف عن h.

بيلوري ومقاومته للمضادات الحيوية في سوائل المعدة بواسطة qPCR. بين عينات إيجابية h. بيلوري.

كان لدى S2 قيم CT ضمن نطاق الكشف تشير إلى مقاومة مزدوجة للكلاريثروميسين والليفوفلوكساسين. كانت قيم S3 CT ضمن الكشف عن عدوى الملوية البوابية ومقاومة الليفوفلوكساسين ، ولكن ليس لمقاومة كلاريثروميسين ، مما يشير إلى مقاومة الليفوفلوكساسين.

وبالمثل ، كان لدى S4 قيم CT يمكن اكتشافها لعدوى الملوية البوابية ومقاومة كلاريثروميسين ولكن ليس لمقاومة الليفوفلوكساسين مما يشير إلى مقاومة كلاريثروميسين. كان لدى S5 قيم CT قابلة للكشف فقط ل h.

تشير عدوى بيلوري إلى الحساسية لكل من المضادات الحيوية وتسمح بالعلاج بأي من الدواءين.