بعد استنساخ الببتيد النواة للحويصلة ، أو علامة تسلسل VNP ، في الطرف الأميني لبروتين الاندماج ، قم بزراعة مرق ليسوجيني سعة خمسة ملليلتر ، أو مقبلات LB ، من التحولات البكتيرية الطازجة عند 37 درجة مئوية إلى التشبع. ثم استخدم ذلك لتلقيح 25 ملليلتر من المرق الرائع ، أو السل ، الذي يحتوي على اختيار مناسب للمضادات الحيوية في دورق مخروطي سعة 500 ملليلتر. احتضان القارورة في حاضنة عند 37 درجة مئوية أثناء الاهتزاز بمعدل 200 دورة في الدقيقة أو أكبر من مساواة رمية مدارية 25 ملم حتى تصل الثقافة إلى قيمة كثافة بصرية تبلغ 600 نانومتر ، أو OD 600 ، من 0.8 إلى 1.0.
بعد ذلك ، قم بتحفيز تعبير البروتين المؤتلف من مروج T7 عن طريق إضافة IPTG إلى تركيز نهائي يصل إلى 20 ميكروغرام لكل مليلتر أو 84 ميكرومولار. بعد إتاحة الوقت الكافي للتحريض, حبيبات الخلايا عن طريق الطرد المركزي عند 3000 G عند 4 درجات مئوية لمدة 20 دقيقة. مرر المادة الطافية من خلال مرشح PES معقم وخالي من المنظفات 0.45 ميكرون لتعقيم الحويصلة التي تحتوي على وسائط للتخزين طويل الأجل.
لتركيز الحويصلات في حجم أصغر ، قم بتمرير الحويصلة المعقمة التي تحتوي على وسائط من خلال مرشح MCE معقم وخالي من المنظفات 0.1 ميكرون. بعد ذلك ، اغسل الغشاء برفق باستخدام 0.5 إلى 1 ملليلتر من المحلول الملحي المعقم المخزن بالفوسفات ، أو PBS ، واستخدم مكشطة الخلايا أو الموزعة البلاستيكية لإزالة الحويصلات بعناية من الغشاء. انقل مركز الحويصلة إلى أنبوب طرد مركزي صغير جديد باستخدام ماصة.
يمكن تخزين الحويصلات المنقاة عند أربع درجات سلزية. قم بتنشيط البروتين الذي يحتوي على حويصلات في الوسائط المعقمة باستخدام جدول زمني مناسب لتعطيل الأغشية الدهنية الحويصلية وإطلاق البروتين. أجهزة الطرد المركزي تعليق صوتي في 39،000 G و 4 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة لإزالة الحطام الحويصلي.
BL21DE3 الإشريكية القولونية التي تحتوي على بنية تعبير VNp6-mNeongreen أظهرت مضان mNeongreen الذي يتم تحريضه بين عشية وضحاها مع IPTG. ظل التألق مرئيا في الثقافة بعد إزالة الخلايا البكتيرية عن طريق الطرد المركزي. تم تأكيد وجود VNp-mNeongreen داخل المستزرع في وسائط الاستزراع التي تم تطهيرها بواسطة الرحلان الكهربائي لكبريتات دوديسيل الصوديوم بولي أكريلاميد جل.
كما أظهرت الحويصلات المنقاة المعاد تعليقها في PBS مضانة.
