ابدأ بوضع فأر تم قتله رحيما لاستئصال العين باستخدام ملقط منحني للضغط على الأنسجة حول العين لإزاحة العين خارج التجويف. ثم ارفع العين وأزلها ، وانقلها إلى برنامج تلفزيوني جديد في درج التشريح. باستخدام مقص فائق الدقة ، قم بقص العصب البصري في أقرب مكان ممكن من مقلة العين ، وأدخل بعناية ملاقط مستقيمة ذات طرف رفيع في مقلة العين من خلال مخرج العصب البصري في الجزء الخلفي من العين.
الآن ، أدخل مقصا في الجزء الخلفي من العين وابدأ في عمل شق من الخلف باتجاه تقاطع القرنية الصلبة ، واستمر في الشق حتى يتم فصل نصف الوصلة. اضغط برفق على القرنية حتى تتمكن العدسة من الخروج من خلال الشق. باستخدام ملاقط مستقيمة ذات طرف رفيع ، قم بإزالة أي قطع كبيرة من الأنسجة بعناية من العدسة.
بعد العثور على المنطقة الاستوائية ، اخترق العدسة بسطحية ، ثم قم بإزالة كبسولة العدسة. انقل خلايا ألياف العدسة إلى طبق 60 ملم مع 1٪ بارافورمالدهيد. باستخدام مشرط حاد ، قم بتقسيم كرة خلايا الألياف إلى نصفين على طول محورها الخلفي الأمامي.
ثم قطع النصفين على طول نفس المحور لإنتاج أرباع. استخدم الملقط المستقيم لإزالة منطقة النواة من ربع خلية ألياف العدسة. بعد ذلك ، أضف 200 ميكرولتر من 1٪ بارافورمالدهيد إلى صفيحة 48 بئرا.
انقل قشرة العدسة إلى اللوحة واحتضانها لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة مع اهتزاز لطيف عند 300 دورة في الدقيقة. بعد الحجب ، أضف الأجسام المضادة الأولية المناسبة إلى لوحة 48 بئرا وانقل العينات إلى محلول الأجسام المضادة الأولية. احتضان العينات طوال الليل عند 4 درجات مئوية مع اهتزاز لطيف أو طفرة.
في اليوم التالي ، اغسل العينات باستخدام PTX ، وبالمثل ، احتضانها بأجسام مضادة ثانوية. بعد غسل العينات ، أضف قطرة واحدة أو 50 ميكرولترا من وسائط التركيب على شريحة مجهر مشحونة زائد. ضع المنديل في وسائط التركيب.
واستخدم الملقط لفصل خلايا الألياف برفق عن بعضها البعض. ثم ضع زلة غطاء برفق أعلى الخلايا المنفصلة ووسائط التركيب. بعد إزالة الوسائط الزائدة ، استخدم طلاء الأظافر لإغلاق حواف الغطاء على الشريحة قبل الفحص المجهري متحد البؤر.
بعد تشريح العدسة وإزالة كبسولة العدسة ، انقل كتلة الخلايا الليفية إلى أطراف أصابع القفاز المبللة ولف برفق في جميع الاتجاهات لفصل نواة العدسة. بعد ذلك ، انقل نواة العدسة إلى محلول بارافورمالدهيد 1٪ طازج في صفيحة من 48 بئرا واحتضانها طوال الليل عند 4 درجات مئوية مع اهتزاز لطيف أو طفرة. في اليوم التالي ، انقل العينة إلى طبق 60 ملم مع 1٪ بارافورمالدهيد واستخدم مشرطا حادا لتقسيم نواة العدسة على طول المحور الخلفي الأمامي إلى نصفين ، ثم إلى أرباع.
بعد ذلك ، قم بإصلاح العينة وحظرها وتلطيخها وتركيبها كما هو موضح سابقا في هذه المستحضرات ، تم العثور على حزم من خلايا ألياف العدسة ذات الأشكال الفريدة من مناطق العدسة المختلفة. يظهر تلطيخ شبكة F-actin إثراء في غشاء الخلية في الألياف المتمايزة والناضجة بينما توجد إشارات F-actin في سيتوبلازم الألياف النووية. يظهر المجهر الإلكتروني الماسح والصور متحدة البؤر لخلايا الألياف المتمايزة تداخلات كروية ومقبس مع نتوءات صغيرة متشابكة ، في حين أن الألياف الناضجة لها مجاذيف مزينة بنتوءات صغيرة.
يكشف المجهر الإلكتروني الماسح وصور المجهر متحد البؤر لخلايا ألياف العدسة النووية عن نتوءات متشابكة نادرة وأكبر على الجوانب القصيرة للخلايا حيث يكون غشاء الخلية خشنا وله تداخل اللسان والأخدود في هذه الخلايا من مركز العدسة.
