ابدأ بجمع بذور فول الصويا البري ، S.Americanum ، والتنوع المحلي من اليقطين. زرع البذور في الفيرميكوليت على عمق سنتيمتر واحد وسقيها جيدا. قم بزراعتها في غرفة النمو بنسبة 70٪ تقريبا رطوبة نسبية.
قم بإزالة سلالة A.rhizogenes K599 من الفريزر 80 درجة مئوية وقم بتنشيطها على وسط LB صلب عند 28 درجة مئوية لمدة 48 ساعة. ثم حدد نسخة واحدة من سلالة K599 واستزرعها في ملليلتر واحد من المضادات الحيوية السائلة التي تحتوي على متوسط LB لمدة 12 ساعة. انشر 500 ميكرولتر من المعلق البكتيري بالتساوي على مضاد حيوي صلب يحتوي على وسط LB واحتضانه عند 28 درجة مئوية لمدة 24 ساعة.
بعد سبعة أيام ، عندما تتكشف النبتات الشتلات ، استخدم مشرطا حادا معقم لقطع ما يقرب من 0.5 إلى سنتيمتر واحد من hypocotyl. تجاهل الجذر الأساسي وجزء من hypocotyl. معطف شق hypocotyl مع البكتيريا K599.
ازرع الشتلات في الفيرميكوليت الرطب وتصيب 30 نباتا من كل نوع باستخدام تحويل جذر الشعر بوساطة A.rhizogenes. ثم سقي النباتات بخمسة ملليلتر من التعليق البكتيري K599 المعاد تعليقه في وسط Gamborg B5 الأساسي ربع القوة. غطي الأواني بكيس بلاستيكي شفاف وضعها في غرفة النمو.
تنمو النباتات لمدة 12 يوما تقريبا بعد التلقيح. في هذا الوقت ، يجب إنشاء جذور شعر جديدة في موقع الشق ، وعادة ما يصل طولها من 2 إلى 5 سنتيمترات. باستخدام نظام تصوير التلألؤ CAMI مع ضوء الإثارة الأخضر عند 540 نانومتر والانبعاثات عند 600 نانومتر ، اكتشف تعبير جين المراسل DsRed2.
يتم تصور جذور النباتات المركبة من فول الصويا البري ، S.Americanum ، واليقطين تحت ضوء الإثارة الطبيعية والخضراء.
