للبدء ، قم بإعطاء التسكين تحت الجلد للفأر المخدر الذي تم حقنه سابقا داخل بطانة الرحم البطينية مع كوكتيل الإطلاق. جبل الفئران على الإطار المجسم. ثبت الرأس باستخدام قضبان الأذن ، مما يضمن عدم إعاقة الحركة الدورانية نحو الأمام والخلف.
ثبت الرأس لأسفل بزاوية 40 درجة لتمديد الجزء الخلفي من الرقبة بشكل صحيح. حلق فرو الرقبة باستخدام ماكينة حلاقة وقم بتطهير الجلد بثلاث جولات متناوبة من 10٪ من اليود البوفيدون والكحول باستخدام مسحات قطنية معقمة ، وفرك في اتجاهات مختلفة لمدة ثلاث إلى خمس ثوان في كل مرة. باستخدام طرف الإصبع ، حدد المنطقة المستديرة الشكل القابلة للاكتئاب بين النتوء القذالي والعمود الفقري للأطلس.
ضع علامة على هذه النقطة باستخدام علامة. تأمين حقنة ملليلتر واحد إلى الإطار المجسم. ضع الإبرة لتلامس الجلد عند العلامة.
باستخدام الملقط ، ارفع الجلد أثناء إدخال المحقنة عبر طبقات الجلد. اسحب المكبس برفق لخلق ضغط سلبي داخل المحقنة. أدخل الإبرة تدريجيا حتى يصبح السائل النخاعي الدماغي مرئيا في المحقنة.
أمسك الإبرة بثبات في هذا الوضع واترك التدفق البطيء للسائل النخاعي الدماغي. قم بإزالة السائل الشوكي الدماغي ببطء حتى 120 ميكرولتر. استرجع المحقنة بعناية.
يتم تطبيق ملليلتر واحد من المصل الطبيعي داخل الصفاق لدعم تجديد سوائل التجارب. اجمع الخزعة السائلة مع 400 ميكرولتر من وسط الخلايا الجذعية العصبية وقم بتخزين أنبوب الطرد المركزي الصغير عند أربع درجات مئوية لاستخدامه لاحقا. ثم نقل إلى منطقة مراقبة ما بعد العملية.
أسفرت خزعات الحلب عن مزارع الخلايا الجذعية العصبية بمتوسط 3.17 إمكانية مرور ، حتى تصل إلى تسعة ممرات. تم طلاء الخلايا المجمعة على آبار مغلفة ب Poly-D-Lysine حيث نمت كطبقات أحادية ملتصقة ونادرا ما تكون كرات عصبية. كانت الخلايا المعزولة حديثا التي كانت إيجابية ل GFAP إيجابية أيضا مناعية للعلامة الهادئة ID3 ولها خاصية مورفولوجيا NSE ثنائية القطب.
أظهرت المقارنة الكيميائية المناعية للخلايا المشتقة من الخزعة والخلايا المشتقة بعد الوفاة أن ملف تعريف الخلايا التي تم جمعها كان مشابها لخلايا المنطقة تحت العصبية الذاتية. أدى عامل النمو إلى زيادة مصاحبة وكبيرة في خلايا SOX2 وانخفاض الخلايا العصبية الإيجابية للكورتين المزدوج في كلتا العينتين.
