تحضير محاليل الأجسام المضادة وحيدة النسيلة (mAb) لإثراء بروتين الخلية المضيفة

ابدأ بتخفيف منتجات أدوية الأجسام المضادة وحيدة النسيلة بشكل مناسب لإثراء بروتين الخلية المضيفة. لتخفيف المنتجات الدوائية بتركيزات أعلى من 50 ملليغرام لكل ملليلتر ، أضف الماء منزوع الأيونات إلى 15 ملليغرام من الجسم المضاد أحادي النسيلة في أنبوب طرد مركزي دقيق 2 ملليلتر. بالنسبة للمنتجات الدوائية التي تقل تركيزاتها عن 50 ملليغرام لكل ملليلتر ، قم بنقل 20 ملليغرام منه إلى جهاز تصفية طرد مركزي 10 كيلودالتون.

أجهزة الطرد المركزي محتويات في 14،000 غرام لمدة 25 دقيقة في درجة حرارة الغرفة لترك ما يقرب من 100 ميكرولتر من المحلول المتبقي في الأنبوب. ثم أضف 350 ميكرولتر من 10 مليمول من المخزن المؤقت للهيستيدين ، مع وجود درجة حموضة ستة في المرشح الذي يليه دوامة الأنبوب قبل الطرد المركزي عند 14،000 جم لمدة 25 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. اقلب المرشح وضعه في أنبوب جمع العينات.

أجهزة الطرد المركزي العينة عند 1000 جم لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة ، مع استرجاع المحلول بالكامل في أنبوب التجميع. أضف 200 ميكرولتر من محلول الهستيدين 10 ملليمولار إلى المرشح واسحب لأعلى ولأسفل لاستعادة عينة البروتين المتبقية. انقل المحلول بالكامل إلى نفس أنبوب التجميع.

دوامة وتدور لأسفل كما هو موضح سابقا. بعد قياس تركيز العينة بواسطة قطرة نانو ، اضبطها على 50 ملليغرام لكل ملليلتر عن طريق إضافة المخزن المؤقت للهستيدين. أخيرا ، انقل 300 ميكرولتر من العينة إلى أنبوب طرد مركزي صغير سعة 2 ملليلتر.