للبدء ، قم بإذابة مخزون الفيروس القهقري RCAS (A) على الجليد. لتجنب انسداد الماصة الدقيقة ، قم بطرد المحلول عند 10،000 جم لمدة 10 ثوان عند أربع درجات مئوية ونقل المادة الطافية إلى أنبوب جديد مع الحفاظ على المحاليل على الجليد. ضع بارافيلم مختبري ممتد على طبق زراعة خلايا 35 × 10 ملم وأضف ميكرولتر واحد من برنامج تلفزيوني معقم إلى البارافيلم.
قم بتوصيل ماصة زجاجية معدة بحاقن بيكو أوتوماتيكي. اضغط على وضع التعبئة لملء PBS في ماصة صغيرة ثم اضغط على وضع الحقن لاختبار ميكرولتر واحد مخصص من السائل. ضع قطعة ثانية من البارافيلم المختبري الممتد على طبق زراعة خلايا جديد وأضف ميكرولترا واحدا من المخزون الفيروسي الملون باللون الأخضر السريع إلى الفيلم.
اخفض طرف الماصة الدقيقة في المخزون الفيروسي ، واضغط على وضع التعبئة لملء الماصة الدقيقة بميكرولتر واحد من المخزون الفيروسي. تحت مجهر التشريح ، قم بخفض الماصة الدقيقة المملوءة المتصلة بحاقن أوتوماتيكي في المنطقة المستهدفة من عدسة جنين الدجاج. ثم اضبط مصدر الضوء لتوفير رؤية واضحة لحويصلة العدسة.
بعد التأكد من أن الماصة الدقيقة ضمن الموقع الصحيح داخل تجويف العدسة ، قم بحقن خمسة إلى 40 نانولترا من المخزون الفيروسي. بعد الحقن ، انتظر 45 ثانية قبل إزالة الماصة الدقيقة برفق. بعد ذلك ، تحقق من الحقن المجهري الناجح عن طريق فحص الصبغة الخضراء السريعة في التجويف الفارغ للعدسة دون تسرب.
بعد الفحص ، أغلق فتحة قشر البيض بشريط سكوتش وضع البيض في حاضنة ثابتة مرطبة 37 درجة مئوية. توضح هذه الدراسة التقييم النسيجي لحلقات connexon 50 و 43 الوهمية من خلال التألق المناعي. باستخدام وضع العلامات المضادة للعلم ، تم تمييز الروابط الخارجية عن تلك الداخلية.
تقوم الدراسة أيضا بتقييم التفاعل بين مجال الحلقة داخل الخلايا ل connexon 50 و Aquaporin zero.
