فصل أنسجة مضيف المرجان وخلايا Symbiodiniaceae لاستخراج الأيض

قم بتجانس عينة المرجان باستخدام خالط سن المنشار الميكانيكي لمدة دقيقة واحدة حتى يتم تجانس العينة بالكامل وعدم ظهور كتل. للتطبيع ، اجمع حصة ملليلتر واحد من الأنسجة المتجانسة لتعداد خلايا Symbiodiniaceae ، وتحليل محتوى بروتين الأنسجة المرجانية ، وتقدير الكلوروفيل-أ. في حالة فصل المادة المضيفة وخلايا الطحالب ، يتم طرد الطرد المركزي للتجانس المرجاني المتبقي عند 2،500 G لمدة خمس دقائق عند أربع درجات مئوية.

انقل المادة الطافية التي تحتوي على المادة المضيفة إلى أنبوب جديد سعة 15 ملليلتر. أضف ملليلتر من الماء البارد عالي النقاء إلى حبيبات الطحالب والدوامة على حد سواء المادة المضيفة وحبيبات الطحالب لمدة دقيقتين لإعادة الاستحمام. أجهزة الطرد المركزي جميع العينات مرة أخرى ونقل المادة الطافية التي تحتوي على المادة المضيفة إلى أنبوب جديد 15 ملليلتر.

بعد التخلص من المادة الطافية من حبيبات الطحالب ، احتفظ بالحبيبات في الأنبوب الأصلي سعة 15 ملليلتر. نسيم إما تجانس holobiont أو المضيف المنفصل في كسور Symbiodiniaceae عند 80 درجة مئوية تحت الصفر لمدة ساعتين على الأقل. بعد ذلك ، قم بتجفيف العينات بالتجميد طوال الليل باستخدام فراغ 0.01 مليبار عند 85 درجة مئوية تحت الصفر.

بعد التجفيف ، قم بوزن كل عينة على ميزان المختبر في أنابيب طرد مركزي دقيقة منفصلة خالية من الملدنات سعة 2 ملليلتر. كشف التصور المجهري عن عدم وجود خلايا Symbiodiniaceae في عينات الأنسجة المضيفة بعد ثلاث خطوات غسيل. وبالمثل ، تم العثور على الحد الأدنى من الأنسجة المضيفة في الكسور المتعايشة.

ومع ذلك ، أشار تجانس holobiont إلى أن Symbiodiniaceae داخل الخلايا لم يتم إطلاقه من تكافلها من خلال البخاخة البسيطة.