Drug Screening Method for Sleep Regulation in an Elderly Drosophila melanogaster Model

للبدء ، خذ زجاجة من الذباب ، وانقلها إلى زجاجة جديدة كل سبعة أيام بالتزامن مع دورة نموها. اجمع الجيل التالي من الذباب الذي يفقس من الزجاجة الأولية بعد ثلاثة أيام من النقل ، وضعه في زجاجة جديدة. بعد ذلك ، ضع الأنبوب الزجاجي في كأس زجاجية كبيرة.

املأه بالماء المقطر المزدوج واغلي لمدة 20 دقيقة. ثم قم بإزالة وحزم الأنبوب الزجاجي. اشطفه ثلاث إلى خمس مرات بالماء المقطر المزدوج ، وضع الأنبوب الزجاجي في الفرن حتى يجف.

باستخدام ماصة، أضف أربعة ملليلترات من المخزن المؤقت للعينة وريزيربين إلى كأس زجاجية صغيرة سعة 10 ملليلترات. بالنسبة لمجموعة التحكم السلبية ، أضف ثنائي ميثيل سلفوكسيد حتى يصل التركيز إلى 0.2٪أدخل بعناية طولا مناسبا من الأنبوب الزجاجي في دورق صغير لتسهيل تدفق الوسط. انتظر حتى تتصلب وسيلة الثقافة بالكامل.

قبل إزالة الأنبوب الزجاجي ، امسح الجدار الخارجي للحصول على أنبوب زجاجي للمراقبة للتأكد من أن أحد طرفيه يحتوي على وسيط الاستزراع مع الأدوية. ثم سخني البارافين الصلب في كأس زجاجية على حرارة 70 درجة سلزية حتى يذوب. اغمر نهاية الأنبوب الزجاجي في البارافين السائل لحوالي خمسة ملليمترات وقم بإزالته بسرعة.

انتظر حتى يتجمد البارافين لإغلاق نهاية الطعام للأنبوب الزجاجي. ضع الذباب المخدر في أنابيب زجاجية محكمة الغلق بالبارافين وقم بسد الطرف غير الغذائي باستخدام كرة قطنية ماصة. قم بتحميل الأنابيب على شاشة الأشعة تحت الحمراء لمراقبتها.

قم بمحاذاة كل أنبوب بحيث تعمل الأشعة تحت الحمراء عموديا عبر مركز النطاق النشط للذباب. اضبط الشاشة داخل حاضنة موجودة في غرفة النوم المظلمة للذباب.