Patch-Clamp Recording to Study the Electrical Responses of Motor Neurons to Spinal Cord Stimulation

للبدء ، ضع شريحة الحبل الشوكي المعدة في غرفة التسجيل. ثم ضع أنود نظام المعالجة الدقيقة بالقرب من خط الوسط الظهري في الكاثود بالقرب من منطقة دخول الجذر الظهري لوضع محفز الحبل الشوكي بشكل صحيح. انتقل الآن إلى عدسة موضوعية 60X لتحديد خلية عصبية صحية لها سطح أملس ومشرق بدون نوى مرئية.

قلل قليلا من شدة الأشعة تحت الحمراء ، وقم بتشغيل مصدر ضوء الفلورسنت ، واضبط مرشح الضوء على خيار الإثارة فوق البنفسجية ذات النطاق العريض. الآن ، حدد خلية عصبية حركية موجبة للفلورو الذهبي وخفض القطب تدريجيا حتى يقترب من الخلية العصبية. عندما تلامس الماصة سطحها ، ابحث عن مسافة بادئة صغيرة للغشاء عند مستوى الطرف وحرر الضغط الإيجابي المطبق مسبقا.

ثم قم بتطبيق الضغط السلبي على الماصة باستخدام حقنة وانتظر حتى ترتفع قيمة المقاومة إلى جيجاأوم على واجهة البرنامج. المشبك جهد الغشاء عند ناقص 70 مللي فولت. اضغط على زر تعويض السعة السريع على واجهة برنامج مكبر الصوت ، ثم قم بتطبيق ضغط سلبي قصير لتمزق غشاء الخلية واضغط على زر تعويض السعة البطيئة على واجهة برنامج مكبر الصوت.

تطبيق تحفيز الحبل الشوكي لمدة ثانية إلى ثانيتين الحفاظ على السعة بين واحد و 10 مللي أمبير. حدد عتبة المحرك عن طريق زيادة سعة التحفيز تدريجيا حتى يتم ملاحظة جهد الفعل الأول. ميز الخلايا العصبية الحركية المتأخرة والفورية باستخدام حقن تيار إزالة الاستقطاب لمدة خمس ثوان حول قاعدة ريوبيس في وضع المشبك الحالي.

بعد إيقاف تشغيل تحفيز الحبل الشوكي ، استمر في تسجيل جهود الغشاء لالتقاط إطلاق جهود الفعل التلقائي. عندما تم رفع سعة تحفيز الحبل الشوكي ، زادت إمكانات الغشاء ، وتم تشغيل جهود الفعل كل 10 إلى 20 نبضة. بعد إيقاف تحفيز الحبل الشوكي، أطلقت الخلية العصبية سلسلة من جهود الفعالية التلقائية لفترة قصيرة من الزمن.

بعد ذلك، عاد جهد الغشاء المستريح إلى سالب 65 مللي فولت.