Generating Kidney Organoids from Induced Pluripotent Stem Cell Suspension Culture

Please note that all translations are AI generated. Click here for the English version.

247 Views

•

02:36 min

•

September 1st, 2023

DOI :

10.3791/200500-v

September 1st, 2023

•

Langping Gao*¹^,², Yue Wang*³, Gang Wang⁴, Hangdi Wu², Qingtao Yan¹, Jingjing Wang¹, Fei Liu¹, Haidong Fu¹, Wei Li⁵, Lidan Hu¹, Jianhua Mao¹^,²

¹Department of Nephrology, The Children's Hospital, Zhejiang University School of Medicine, ²Zhejiang University School of Medicine, ³Hubei Normal University, ⁴National Clinical Research Center of Kidney Diseases, Jinling Hospital, Nanjing University School of Medicine, ⁵Clinical Laboratory, The Children’s Hospital, Zhejiang University School of Medicine, National Clinical Research Center for Child Health

* These authors contributed equally

Transcript

ابدأ بإزالة المرحلة الثانية من الوسط من معلق خلية iPSC في اليوم الثقافي السابع. الآن غسل الخلايا مع ملليلتر من DPBS. ماصة ملليلتر واحد من محلول انفصال الخلايا لكل بئر.

ثم ضع اللوحة في حاضنة عند 37 درجة لمدة خمس دقائق. بعد الحضانة ، أضف ملليلتر واحد من المرحلة الثانية المتوسطة إلى الخلايا واخلطها جيدا حتى تنفصل الخلايا عن السطح. اجمع تعليق الخلية في أنبوب سعة 15 ملليلتر ، ثم قم بطرده مركزيا عند 400 جرام لمدة ثلاث دقائق في درجة حرارة الغرفة.

بعد الطرد المركزي ، تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق حبيبات الخلية في ملليلتر من وسط المرحلة الثالثة. امزج المحلول برفق. الآن قم بزرع التعليق في لوحة ذات ستة آبار منخفضة الالتصاق بنسبة واحد إلى ثلاثة.

ضع اللوحة على شاكر مداري في حاضنة محددة عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون. لإزالة الوسط في ثقافة التعليق ، قم أولا بقطع طرف ماصة ملليلتر واحد باستخدام مقص معقم. ثم حرك بلطف لوحة ستة آبار لتركيز المواد العضوية.

بعد ذلك ، قم باستنشاق المواد العضوية باستخدام الماصات الجاهزة ووضعها في أنبوب سعة 15 ملليلتر ، واتركها تقف لمدة خمس دقائق. نضح المادة الطافية ، مع التأكد من بقاء المواد العضوية في قاعدة الأنبوب. ثم ماصة المرحلة الثالثة المتوسطة في لوحة.

ماصة الخليط لإعادة تعليق المواد العضوية. أعد طلاء المواد العضوية مرة أخرى في لوحة منخفضة الالتصاق بستة آبار. استمر في هز لوحة الالتصاق المنخفضة بمعدل 60 دورة في الدقيقة في الحاضنة.

في اليوم 12 ، استبدل الوسيط بالمرحلة الرابعة المتوسطة. تعرض عضويات الكلى هياكل تشبه الأنابيب ويمكن ملاحظتها بسهولة في صور المجال الساطع بعد 18 يوما من التجميع. تم تحفيز الخلايا البطانية CD31.

تم أخذ ديكستران في الأنابيب القريبة من عضويات الكلى.

Explore More Videos

Kidney Organoids

Induced Pluripotent Stem Cells

CD31 Endothelial Cells