للبدء ، بعد الحصول على الحمض النووي الريبي الطويل غير المشفر محل الاهتمام ، احتضان المخزن المؤقت للتهجين عند 37 درجة مئوية لمدة ساعتين. بعد ذلك ، قم بإذابة مسبار الكثافة الضوئية الأربعة في 160 ميكرولتر من الماء منزوع الأيونات المعالج بثنائي إيثيل بيروكربونات بعيدا عن الضوء. قم بإعداد 200 ميكرولتر من خليط المسبار لكل بئر ، وقم بإعداد سلسلة من 50 و 25 و 12.5 وستة ميكروجرام لكل ملليلتر.
قم بتشويه مزيج المسبار عند 73 درجة مئوية لمدة خمس دقائق. خذ لوحة زراعة خلايا 12 بئرا تحتوي على خلايا 143B على زلات غطاء زجاجي معقمة. انزع الوسط واغسله مرتين لمدة خمس دقائق باستخدام برنامج تلفزيوني.
ضع الخلايا على شاكر. ثم قم بإزالة PBS وإضافة 200 ميكرولتر من الإيثانول بنسبة 100 ٪ إلى كل بئر ، وتثبيت لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ثم قم بإزالة الإيثانول ، وأضف 200 ميكرولتر من 0.1٪ Triton X-100 إلى كل بئر ، واحتضان لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
قم بإزالة 0.1٪ Triton X-100 واغسله مرتين لمدة خمس دقائق باستخدام برنامج تلفزيوني. بعد ذلك ، قم بإزالة PBS ، وأضف 200 ميكرولتر من سترات الصوديوم المالحة مرتين أو المخزن المؤقت SSC في كل بئر ، واحتضانها لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية. قم بإزالة المخزن المؤقت SSC مرتين ، وأضف 200 ميكرولتر من الإيثانول بنسبة 70٪ في كل بئر ، واحتضانه لمدة ثلاث دقائق في درجة حرارة الغرفة.
تخلص من 70٪ من الإيثانول ، ثم أضف 200 ميكرولتر من 85٪ إيثانول في كل بئر واحتضانها لمدة ثلاث دقائق في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك ، تخلص من 85٪ إيثانول ، وأضف 200 ميكرولتر من الإيثانول بنسبة 100٪ إلى كل بئر ، واحتضانها لمدة ثلاث دقائق في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك ، قم بامتصاص الإيثانول بنسبة 100٪ وتخلص منه واترك الآبار تجف.
بعد ذلك ، أضف 200 ميكرولتر من خليط المسبار المشوه إلى كل بئر ، ثم احتضانه عند 37 درجة مئوية طوال الليل. في اليوم التالي ، قم بإزالة العينات من 37 درجة مئوية ، وتخلص من خليط المسبار ، وأضف 200 ميكرولتر من المخزن المؤقت المسخن مسبقا 0.4 مرة SSC 0.3٪ Tween 20 إلى كل بئر واغسله لمدة دقيقتين في درجة حرارة الغرفة. قم بإزالة المخزن المؤقت SSC 0.3٪ Tween 20 0.4 مرة.
أضف 200 ميكرولتر مرتين SSC 0.1٪ Tween 20 buffer إلى كل بئر واغسله لمدة دقيقتين في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك ، تجاهل المخزن المؤقت SSC 0.1٪ Tween 20 مرتين. أضف 200 ميكرولتر من محلول تلطيخ DAPI وصمة عار لمدة 20 دقيقة في الظلام على شاكر.
بعد تلطيخ ، تخلص من محلول DAPI واغسله باستخدام PBS لمدة دقيقتين في درجة حرارة الغرفة. أخيرا ، أضف 50 ميكرولترا من وسط التثبيت الذي يحتوي على صمغ إلى الشريحة وضع انزلاق الغطاء الزجاجي لإصلاح الشريحة. يتم عرض صور SNHG6 FISH التمثيلية في خلايا الساركوما العظمية البشرية.
أظهر مسبار SNHG6 المسمى ب Cy3 ، والذي ينبعث منه مضان أحمر ، أن SNHG6 موضعي بشكل أساسي في السيتوبلازم. لوحظ لون الخلفية عند استخدام تركيز عال من المسبار.
