للبدء ، ضع عينات الجلطة الدموية الدماغية التي تم جمعها على طبق نظيف باستخدام الملقط. ثم ، باستخدام ماصة ، أضف خمسة ملليلتر من المحلول الملحي الفسيولوجي إليها وهز الطبق برفق. قم بإزالة المحلول الملحي باستخدام ماصة.
باستخدام مقص ، اقطع الجلطات إلى قطع صغيرة. مرة أخرى ، أضف خمسة ملليلتر من المحلول الملحي الفسيولوجي إلى الجلطات وهز الطبق برفق قبل استنشاق المحلول الملحي باستخدام ماصة. ثم ، باستخدام الملقط ، انقل قطع الجلطات إلى لوحة U جديدة ونظيفة.
قم بإعداد حل عمل SFE عن طريق ضبط تركيز SFE إلى 2،000 وحدة لكل مليلتر باستخدام محلول ملحي فسيولوجي. أضف 300 ميكرولتر من محلول عمل SFE إلى الجلطات المعالجة مسبقا. لبدء الجولة الأولى من التحلل ، احتضان خليط SFE والجلطات عند 37 درجة مئوية لمدة نصف ساعة.
بعد ذلك ، رج برفق لخلط العينة المعالجة SFE. وباستخدام ماصة نظيفة ، انقل الجزء السائل إلى أنبوب معقم. ضع الجلطة المتبقية جانبا لجولة أخرى من التدهور.
أجهزة الطرد المركزي السائل الذي تم جمعه عند 200 غرام لمدة خمس دقائق عند أربع درجات مئوية. بعد ذلك ، باستخدام ماصة ، انقل المادة الطافية أو محلول SFE المسترد إلى أنبوب نظيف آخر. أعد تعليق حبيبات الخلايا الناتجة في 50 ميكرولترا من المحلول الملحي الفسيولوجي عن طريق الخلط اللطيف.
بعد ذلك ، قم بإجراء جولات لاحقة من التدهور على الجلطات المتبقية باستخدام محلول SFE المسترد كما هو موضح سابقا. اجمع خليط الخلايا من كل جولة من التحلل لتحضير عينة خلايا الدم. أضف خمسة ميكرولترات من عينة الخلية التي تم الحصول عليها إلى الشريحة الزجاجية المطلية بالبولي L-lysine.
وباستخدام زلة غطاء ، تشويه الخلايا. اترك السائل يتبخر في درجة حرارة الغرفة. لأداء تلطيخ الخلايا ، أضف بلطف 100 ميكرولتر من صبغة الحقوق إلى لطاخة الخلية.
اترك الخلايا تلطخ لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة قبل شطف الصبغة برفق بالماء النظيف. أخيرا ، افحص الخلايا الملطخة باستخدام المجهر الضوئي. لوحظت جلطات دموية حمراء مدمجة مع محلول عمل عديم اللون خلال المرحلة المبكرة من التحلل.
لوحظ انحلال الجلطة بعد حضانة لمدة 30 دقيقة وحضانة طويلة تصل إلى خمس ساعات حلت معظم الجلطات ، في حين لم يكن هناك تغيير كبير في مجموعة التحكم السلبية ، حتى بعد حضانة لمدة 10 ساعات. بعد تلطيخ اليمين ، تم التعرف بوضوح على خلايا الدم الحمراء الناضجة والصفائح الدموية والخلايا المحببة المختلفة تحت المجهر الضوئي. يمكن تحليل مكونات الخلية كميا بمساعدة أمراض الدم الذاتية بنجاح.
