للبدء ، ضع ماوس C57 Black / 6 JRj المخدر. ضعيف على طاولة عملية ساخنة. تأكد من عدم وجود استجابات منعكسة لقرص إصبع القدم.
رش الماوس بنسبة 70٪ إيثانول لمنع الشعر من الالتصاق بالمقص. باستخدام المقص ، قم بعمل شق في البطن في القاعدة ، وقم بقصه لأعلى على كلا الجانبين إلى القفص الصدري لفضح تجويف البطن. استخدم قطعة قطن لتحريك الأمعاء إلى اليمين ، وفضح الوريد البابي.
باستخدام ملقط منحني ، ضع رباطين تحت الوريد البابي واربط كل رباط بشكل فضفاض. بعد ذلك ، أدخل قسطرة 0.7 ملم في الوريد البابي. عند ثقبها ، قم بإزالة الإبرة من القسطرة وتوجيه القسطرة عبر الوريد حتى يصبح طرف القسطرة قريبا من الكبد.
ثم شد الأربطة. مراقبة الكبد. اضبط معدل التدفق من مضخة الأسطوانة وقم بتوصيل أنبوب الإفراج.
بدء وفرة الكبد عند 37 درجة مئوية. بمجرد أن يصبح الكبد شاحبا ، استخدم المقص لقطع القفص الصدري والحجاب الحاجز. ثم ، باستخدام ملقط نقطة دقيقة ، ضع الرباط تحت الوريد الأجوف السفلي فوق الكبدي.
بعد ذلك ، أدخل قسطرة في الوريد الأجوف السفلي فوق الكبدي من خلال الأذين الأيمن للقلب. عند ثقبها ، قم بإزالة الإبرة وتوجيه القسطرة عبر الوريد بالقرب من الكبد. ثم شد الرباط.
قم بتوصيل أنبوب لجمع النفايات السائلة للتروية وتأمين جميع الأنابيب بشريط مقاوم للماء. باستخدام محول مشبك الوعاء ، ضع مشبك وعاء عبر الوريد الأجوف تحت الكبدي مباشرة فوق الوريد الكلوي الأيمن لمنع الخليط الميت. بعد ذلك ، قم بزيادة معدل تدفق التروية إلى 3.5 ملليلتر في الدقيقة.
ابدأ المؤقت وتسجيل الضغط. غطي الكبد بستارة معقمة مبللة بالمحلول الملحي ، وازنها لمدة 30 دقيقة ، وقم بقياس حجم النفايات السائلة. بعد 30 دقيقة من التوازن، ابدأ التجربة لأول مجموعة عينات أساسية في جامع الكسر.
راقب مصيدة الفقاعات بانتظام وأعد تعبئتها بمخزن التروية المؤقت عندما تكون قريبة من الفراغ. اجمع عينة عازلة عبر محبس ثلاثي الاتجاهات مباشرة قبل دخولها إلى العضو ومن قسطرة التجميع التي يتم إدخالها في الوريد الأجوف السفلي. باستخدام محلل غازات الدم ، قم بقياس العينة التي تم جمعها للتأكد من أن العضو نشط أيضيا.
بعد 15 دقيقة من التروية الأساسية ، باستخدام مضخة حقنة ، ابدأ التحفيز الأول عن طريق غرس مادة اختبار من خلال محبس ثلاثي الاتجاهات بمعدل التدفق المطلوب. بعد المحاكاة، اجمع عينات خط الأساس لمدة 20 إلى 30 دقيقة قبل بدء التحفيز الثاني. يشير إنتاج اليوريا في الكبد المثقوب مع فترات خط الأساس الثابتة التي تسبق كل فترة من فترتي التحفيز إلى أن استجابة اليوريا لتحفيزين متتاليين مع الأحماض الأمينية المختلطة ثابتة.
لوحظ إطلاق قاعدي ثابت للجلوكوز والأحماض الدهنية غير الأسترية. قبل زيادة قوية في الجلوكوز والأحماض الدهنية غير ED أثناء ضخ الجلوكاجون. تشير القيمة المتوسطة في الحالة القاعدية وأثناء ضخ الجلوكاجون إلى أن الجلوكاجون يحفز بسرعة تحلل الجليكوجين الكبدي وتحلل الدهون.
ومع ذلك ، بدون فترات قاعدية ثابتة ، يصبح من المستحيل التمييز بين استجابة اليوريا والتالية.
