للبدء ، خذ 500 ميكرولتر من محلول PBS / BEV المحضر. امزجه مع ثلاثة ملليلتر من PBS واخلطه برفق باستخدام ماصة 1،000 ميكرولتر. ضع أنبوب طرد مركزي فائق سعة 31 ملليلتر على صفيحة رغوية بها ثقوب ، وقم بتسمية الأنبوب بسهم لأسفل.
ثم أمسك ماصة 1،000 ميكرولتر عموديا وأضف ثلاثة ملليلتر من محلول اليوديكسانول 50٪ إلى قاع الأنبوب. ضع حامل أنبوب أعلى قليلا من مستوى لوحة الرغوة أسفل فتحة الأنبوب ، وقم بإمالة الأنبوب بزاوية 70 درجة. باستخدام ماصة 1،000 ميكرولتر ، أضف ثلاثة ملليلتر من محلول اليوديكسانول 40٪ فوق محلول اليوديكسانول 50٪.
ثم ضع ثلاثة ملليلتر من محلول اليوديكسانول 20٪ على محلول اليوديكسانول 40٪. باستخدام ماصة 1،000 ميكرولتر ، أضف ثلاثة ملليلتر من محلول يوديكسانول 10٪ فوق محلول اليوديكسانول المحضر بنسبة 20٪. بعد ذلك ، أضف 3.5 ملليلتر من محلول PBS / BEV فوق محلول اليوديكسانول 10٪ ، وأعد الأنابيب برفق إلى وضع رأسي.
الآن ، ضع أنبوب طرد مركزي فائق سعة 31 ملليلتر على صفيحة رغوية بها ثقوب ، وقم بتسميته بسهم تصاعدي. باستخدام ماصة 1،000 ميكرولتر ، أضف عموديا 2.5 ملليلتر من محلول مخزون اليوديكسانول 60٪ في قاع الأنبوب ، وادمجه مع 500 ميكرولتر من محلول PBS / BEV للحصول على ثلاثة ملليلتر من محلول 50٪ iodixanol BEV. امزج المحلول جيدا عن طريق الماصة.
ثم بعد وضع طبقات من محلول اليوديكسانول 40 و 20 و 10٪ بالتسلسل ، استخدم ماصة 1،000 ميكرولتر لإضافة 3.5 ملليلتر من PBS فوق محلول اليوديكسانول 10٪. اضبط وزن الأنبوبين باستخدام PBS على الوزن الإجمالي في حدود زائد ناقص 0.005 جرام. بعد ذلك ، ضع الأنابيب في الدلاء وأجهزة الطرد المركزي عند 160،000 جم لمدة سبع ساعات عند أربع درجات مئوية.
باستخدام جهاز سحب ، اجمع الكسور التي تم الحصول عليها من وضع الطرد المركزي الفائق المتدرج بالتتابع من أعلى إلى أسفل مقابل الجدار الجانبي في 10 أنابيب منفصلة للطرد المركزي الفائق سعة 38.5 ملليلتر. ثم أجهزة الطرد المركزي الفائقة الكسور عند 160،000 غرام لمدة 70 دقيقة عند أربع درجات مئوية. قم بإزالة المادة الطافية ، واقلب أنابيب الطرد المركزي الفائقة لمدة خمس دقائق.
بعد ذلك ، أعد تعليق الكريات في 200 ميكرولتر من PBS المبرد مسبقا باستخدام ماصة 200 ميكرولتر. انقل محلول PBS / BEV إلى أنبوب دقيق نظيف سعة 1.5 ملليلتر. قم بتسمية الكسور من F1 إلى F10 كما تم الحصول عليها من وضع الطرد المركزي الفائق المتدرج ، وتابع التحليل.
