Extracellular Vesicle (EV) Isolation from Human Urine Samples Using the EVtrap Approach

للبدء ، اجمع عينات البول من الأفراد الأصحاء. جهاز طرد مركزي 12 ملليلتر من العينة في أنبوب مخروطي 15 ملليلتر للتخلص من حطام الخلايا في الأجسام المبرمج الكبيرة. ثم انقل 10 ملليلتر من المادة الطافية إلى أنبوب جديد سعة 15 ملليلتر.

أضف ملليلتر واحد من مخزن التحميل المؤقت و 200 ميكرولتر من ملاط حبة مصيدة EV إلى العينة. احتضان العينة في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة مع الدوران من طرف إلى طرف. لحبيبات العينة, ضع الأنبوب المخروطي 15 ملليلتر على رف فاصل مغناطيسي.

قم بإزالة المادة الطافية بعناية وأعد تعليق الخرز في ملليلتر واحد من المخزن المؤقت للغسيل. بعد ذلك ، انقل التعليق إلى أنبوب طرد مركزي صغير سعة 1.5 ملليلتر وماصة برفق لإعادة تعليق الحويصلة خارج الخلية أو الخرز المرتبط ب EV. ضع أنبوب الطرد المركزي الصغير على رف فاصل مغناطيسي لأنابيب 1.5 ملليلتر.

باستخدام ماصة P200 ، استنشق بعناية طاف طفا. الآن ، اغسل الخرز بملليلتر واحد من المخزن المؤقت للغسيل ، متبوعا بغسلتين مع ملليلتر واحد من PBS في درجة حرارة الغرفة. احتضان الخرز مع 100 ميكرولتر من 100 ملليمولار ثلاثي إيثانولامين طازج لمدة خمس دقائق.

باستخدام رف فاصل مغناطيسي لأنبوب الطرد المركزي الصغير سعة 1.5 ملليلتر ، اجمع الحل المراوغ الذي يحتوي على EVs. بعد الجمع بين المحاليل المستعصية ، جفف eluit ، باستخدام مكثف طرد مركزي فراغي عند أربع درجات مئوية.