Isolation of Extracellular Vesicle (EV)-Rich Plasma from Human Blood and Detection of Activated Clotting Time

للبدء ، أجهزة الطرد المركزي دم الإنسان عند 120 جم لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة لإزالة خلايا الدم. ثم انقل النصف العلوي من المادة الطافية إلى أنبوب جديد. بعد ذلك ، يقوم جهاز الطرد المركزي بالبلازما الغنية بالصفائح الدموية لإزالة الصفائح الدموية ، ونقل النصف العلوي من المادة الطافية إلى أنبوب جديد.

ثم قم بإزالة حطام الخلية عن طريق الطرد المركزي للصفائح الدموية إلى البلازما لدينا عند 13،000 غرام لمدة دقيقتين. نقل النصف العلوي من طاف إلى أنبوب جديد. قم بتشغيل محلل الجلطة للكشف عن الحويصلة خارج الخلية ، أو وقت التخثر المنشط ب EV ، وقم بتسخين الجهاز مسبقا إلى 37 درجة مئوية.

قم بتثبيت المسبار القابل للتصرف وكوب الاختبار. ثم ابدأ إجراء مراقبة الجودة للجهاز. بعد تشغيل مراقبة الجودة ، أدخل معلومات العينة في النظام.

ثم أضف 200 ميكرولتر من البلازما الغنية ب EV إلى كوب الاختبار ، تليها 20 مللي مولار ، 170 ميكرولتر من كلوريد الكالسيوم. انقر فوق زر البدء ، وأغلق الغطاء ، واسمح للمسبار باكتشاف التغيير في مقاومة العينة. تظهر عينات EV غير المؤهلة مجموعة متميزة ذات حجم جسيمات أكبر قليلا بالقرب من بوابة EV.In التباين ، أظهرت العينات المؤهلة الغنية بالمركبات الكهربائية معظم الإشارات داخل بوابة EV كمجموعة واحدة.

أدت الزيادة في تركيز EV إلى تقصير وقت التخثر المنشط للمركبات الكهربائية ، بينما أدى انخفاض تركيز EV إلى إطالة وقت التخثر المنشط للمركبات الكهربائية. كانت عينات البلازما الغنية ب EV من المرضى الذين يعانون من تسمم الحمل وكسور الورك وسرطان الرئة أقصر بكثير من وقت التخثر المنشط ب EV مقارنة بالمتطوعين الأصحاء.