للبدء ، خذ 10 ملليلتر من عينة ماء المشطورة في أنبوب طرد مركزي. أجهزة الطرد المركزي الأنبوب في 13،400 غرام لمدة خمس دقائق. باستخدام مسدس ماصة ، تخلص بعناية من 9.8 ملليلتر من المادة الطافية.
ثم انقل 200 ميكرولتر من عينة ماء المشطورة المخصبة إلى أنبوب طرد مركزي سعة 2 ملليلتر. بعد ذلك ، خذ 0.5 جرام من أنسجة هامش الرئة من جسم الإنسان الغارق. باستخدام المقص ، اقطع أنسجة الرئة حتى تصبح موحلة.
لاستخراج الحمض النووي من عينات المشطورة والرئة ، أضف أولا حبات زجاجية إلى كلتا العينتين. بعد خلط العينات جيدا ، أضف 40 ميكرولترا من البروتيناز K إلى الأنابيب. بعد حضانة لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة ، أضف 200 ميكرولتر من المخزن المؤقت للربط إلى كلا الأنبوبين.
خلط العينات على الفور مع خلاط دوامة لمدة أربع دقائق. ثم ضع الأنابيب في حمام مائي عند 70 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. حتى يصبح الحل واضحا.
بعد ذلك ، قم بنقل المحلول الواضح باستخدام راسب الندف. في عمود امتزاز بطول ثلاثة سنتيمترات معبأ بمصفوفة السيليكون. أجهزة الطرد المركزي العمود في 8،000 غرام لمدة 30 ثانية.
ثم تخلص من سائل النفايات في أنبوب التجميع وأعد العمود إلى أنبوب التجميع. أضف الآن 500 ميكرولتر من المخزن المؤقت لإزالة المانع في العمود وأجهزة الطرد المركزي عند 13،400 جم لمدة 30 ثانية. بعد التخلص من سائل النفايات ، أضف 700 ميكرولتر من المخزن المؤقت للغسيل إلى العمود وأجهزة الطرد المركزي مرة أخرى.
بعد التخلص من سائل النفايات ، ضع عمود الامتزاز مرة أخرى في أنبوب التجميع الفارغ. أجهزة الطرد المركزي العمود في 14،500 G لمدة دقيقتين لإزالة أكبر قدر ممكن من المخزن المؤقت للغسيل. الآن أخرج العمود وضعه في أنبوب طرد مركزي نظيف.
أضف 100 ميكرولتر من المخزن المؤقت للشطف إلى الجزء الأوسط من غشاء الامتزاز. أجهزة الطرد المركزي العمود في 13،400 غرام لمدة دقيقة واحدة بعد حضانة لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. انقل المحلول الذي تم الحصول عليه في أنبوب التجميع مرة أخرى إلى عمود الامتزاز قبل الطرد المركزي مرة أخرى.
قم بتخزين الحمض النووي للدياتوم المستخلص عند درجتين إلى ثماني درجات مئوية للاستخدام في المستقبل. أظهر الرحلان الكهربائي لهلام الأغاروز نطاقات الحمض النووي للدياتوم بين 250 إلى 500 BP في كل من عينات المياه والأنسجة بعد تضخيم PCR.
