Embedding Gastric Biopsy-Derived Single Cells in a Basement Membrane Matrix Dome for Organoid Generation

للبدء ، قم بإزالة مصفوفة غشاء القاع المذاب من الجليد. أضف الحجم المحسوب لمصفوفة الغشاء القاعدي إلى الخلايا المفردة المشتقة من خزعة المعدة ، واخلطها برفق عن طريق السحب لأعلى ولأسفل لمدة 10 ثوان تقريبا. ثم باستخدام ماصة ، ونقل بسرعة ، و 50 ميكرولتر من المصفوفة ، وخليط الخلية إلى مركز الآبار الفردية في لوحة زراعة الأنسجة 24 بئرا.

قم بتغطية اللوحة على الفور ، وبحركة واحدة سلسة ، اقلب اللوحة رأسا على عقب. ضع اللوحة المقلوبة في حاضنة زراعة الأنسجة 37 درجة مئوية لمدة 35 دقيقة للسماح لمصفوفة الغشاء القاعدي بالبلمرة. ثم أضف 500 ميكرولتر من الوسائط العضوية المعدة الدافئة إلى كل بئر مع ضمان غمر الجزء العلوي من كل قبة بالكامل في الوسائط.

يمكن التعرف على المواد العضوية بشكل عام في غضون 10 أيام بعد بذر الخلايا المفردة. بحلول اليوم 20 ، تكون كبيرة ، وعادة ما تحتاج إلى المرور. يبلغ عدد الكائنات العضوية في الجسم والغار ذروته في اليوم 10 بعد البذر قبل أن يتناقص ، وإن لم يكن بشكل ملحوظ.

أظهرت المواد العضوية الناتجة عن أنسجة خزعة الوشاح معدل نمو أكبر مقارنة بالمواد العضوية الناتجة عن أنسجة خزعة الجسم. عبر مرضى مختلفين ، لوحظ عادة تنوع مورفولوجيا عضوي في أي قبة واحدة. ومع ذلك ، في المتوسط ، أظهر التشنج العضوي اختلافا طفيفا.