الحقن المجهري للحمض النووي الريبي dsRNA في الشرانق الشجرية الترايكوغرامية ومراقبة النتائج التنموية

للبدء ، قم بتشغيل مجتذب الإبرة الزجاجية ، ثم اضبط الحرارة على 280 ، والسرعة على 170 ، والتأخير إلى 250 ، والقطب على 30. شطبة طرف الإبرة الزجاجية الشعرية. ثم باستخدام مضخة حقن صغيرة ، قم بتحميل ما يقرب من ميكرولتر من محلول الحمض النووي الريبي المزدوج الذي تقطعت به السبل في إبرة الحقن.

نقل لوحة أجار تحتوي على الشرانق Trichogramma dendrolimi إلى مرحلة المجهر المركب. أدخل إبرة الحقن بعناية في بطن خادرة بزاوية 30 درجة تقريبا وقم تدريجيا بحقن خمسة نانولترات من محلول الحمض النووي الريبي المزدوج المزدوج التماثل بسلسلة الفيريتين الثقيلة. احتضان ما يقرب من 700 خادرة لكل علاج عند 25 درجة مئوية لمدة 24 أو 48 ساعة.

استخراج محتوى الحمض النووي الريبي من 100 الشرانق لكل تكرار. من حوالي 50 خادرة لكل علاج ، لاحظ ظهور الدبابير. أخيرا ، سجل معدل ظهور الدبابير ومعدل التشوه.

أظهرت الشرانق T.dendrolimi التي تم حقنها بسلسلة ثقيلة مزدوجة الفيريتين التي تقطعت بها السبل معدل ظهور أقل بكثير مقارنة بتلك التي تم حقنها ب GFP مزدوج الجديلة أو بدون حقن. في الدبابير الناشئة ، 51.85 ٪ من الدبابير T.dendrolimi التي تعرضت لسلسلة الفيريتين الثقيلة مزدوجة تقطعت بهم السبل التماثل وضعت أجنحة صغيرة مشوهة. كان هذا التشوه غائبا في الدبابير المحقونة ب GFP المزدوج أو تلك التي لا تحتوي على أي حقن.

بالإضافة إلى ذلك ، أظهرت الشرانق T.dendrolimi التي تم حقنها بسلسلة ثقيلة من الفيريتين مزدوجة الشريط الميلانية ، مما يدل على استقلاب الحديد غير الطبيعي. لم يلاحظ الميلانين في الدبابير المحقونة ب GFP المزدوج أو تلك التي لا تحتوي على أي حقن.