عزل الشظايا المخصب بالمناعة لدماغ الفأر لقياس كمية هيستون PTM

Please note that all translations are AI generated. Click here for the English version.

220 Views

•

01:39 min

•

September 15th, 2023

DOI :

10.3791/200980-v

September 15th, 2023

•

Morgan Towriss¹, Jennifer Kim², Annie Vogel Ciernia¹

¹Department of Biochemistry and Molecular Biology, Djavad Mowafaghian Centre for Brain Health, University of British Columbia, ²Graduate Program in Neuroscience, Djavad Mowafaghian Centre for Brain Health, University of British Columbia

Transcript

ابدأ بإضافة 2.125 ملليلتر من تدرج الكثافة متساوي التوتر إلى أنبوب بولي بروبيلين سعة 15 ملليلتر يحتوي على تجانس دماغ الفئران. قم بتعبئة كل أنبوب بمخزن مؤقت للفاكس إلى حجم نهائي يبلغ 8.5 ملليلتر. اقلب الأنابيب برفق 20 مرة لتختلط جيدا.

باستخدام ماصة نقل متدرجة ضيقة ، قم بتغطية أربعة ملليلتر من اللون الوردي ، وتدرج الكثافة بنسبة 37٪ لإنشاء طبقتين نظيفتين. قم بتبديل ماصات النقل وبطانة ملليلتر من اللون الأزرق ، وتدرج كثافة 70٪ أسفل طبقة 37٪. انقل الأنابيب إلى جهاز طرد مركزي بارد إلى أربع درجات مئوية وقم بتدويرها عند 500 جرام لمدة 20 دقيقة مع ضبط منحدر الكبح على أدنى إعداد.

بعد الطرد المركزي ، تخلص من المايلين من أعلى الأنبوب سعة 15 ملليلتر باستخدام ماصة نقل نظيفة. اجمع بعناية الجزء العلوي من تدرج الكثافة في أنبوب بولي بروبيلين نظيف سعة 15 ملليلتر باستخدام ماصة نقل أخرى. بعد ذلك ، اجمع كل الخلايا في العينة عن طريق تدوير الماصة ببطء على طول جوانب الأنبوب أثناء جمع الجزء المخصب بالمناعة.

انقل الجزء المخصب المناعي إلى أنبوب بولي بروبيلين جديد سعة 15 ملليلتر. اغسل العينة بإضافة 10 ملليلتر من الفاكس إلى الأنبوب. اقلب الأنبوب برفق 20 مرة حتى يمتزج جيدا.

قم بتدوير الأنابيب في جهاز طرد مركزي مبرد مع ضبط منحدر الكبح على أدنى إعداد لتكوير الخلايا المناعية المعزولة.

Explore More Videos

Mouse Brain

Immune enriched Fragment

Histone PTM Quantification

Isotonic Density Gradient

Murine Brain Homogenate