قم بإعداد قوالب التضمين عن طريق إنشاء رقائق قصدير أسطوانية لكل عينة. املأ القوالب بدرجة حرارة القطع المثلى أو مركب OCT. ثم تحضير اثنين من برميل العزل.
املأ البرميل الصغير بالإيزوبنتان والبرميل الكبير بالنيتروجين السائل. ضع البرميل الصغير داخل البرميل الأكبر قبل 10 دقائق من تشريح العضلات. ابدأ بإعداد الماوس للتشريح.
قطع فتح الجلد على وجه الفأر لفضح عضلة ماستر. قم بإزالة الغدد النكفية لكشف الجزء الخلفي من عضلة العضلة العضلية بالكامل. تشريح عضلة العضل من ملحقها الأمامي حتى ارتباطها الخلفي على الفك السفلي.
ثم اغمر الأنسجة العضلية في OCT ، مع الاحتفاظ بها عموديا على المركب. انقل القالب إلى الأيزوبنتان المبرد مسبقا باستخدام حامل إبرة. انتظر لمدة 40 ثانية حتى يصبح OCT أبيض وصلب.
قم بتخزين عينات العضلات المجمدة الطازجة في لوحات مصنفة من 24 بئرا. قسم العينات على الفور عند 20 درجة مئوية ، أو قم بتخزينها عند 80 درجة مئوية للاستخدام على المدى الطويل. بعد ذلك ، قم بقطع الجلد من الكاحل إلى الركبة وإزالة اللفافة لفضح عضلة الظنبوب الأمامية.
استخدم طرف ملقط التشريح المجهري لعزل وتر الظنبوب الأمامي وحركه لأعلى إلى الركبة لكسر الألياف المرتبطة بالظنبوب. قطع الوتر في الكاحل. كشف تلطيخ HE و sirius الأحمر أنه عند إصابة التجمد ، أظهرت عضلة الظنبوب الأمامية تجديدا كاملا بعد 14 يوما مع مورفولوجيا مشابهة للتحكم السليم.
في المقابل ، أظهرت عضلة العضل ضعفا في تجديد الألياف العضلية وترسبا مفرطا للمصفوفة خارج الخلية بعد 14 يوما من إصابة التجميد. أظهر التلوين المناعي النسيجي ل Pax7 بعد 14 يوما من الإصابة نوى مكتظة بالسكان ولكن بدون زيادة نسبية في الخلايا العضلية التابعة. تم الكشف عن عدد كبير من الألياف العضلية المركزية في عضلة الظنبوب الأمامية في 14 يوما بعد الإصابة ، في حين أن محيط الألياف العضلية كان بالكاد ملحوظا في عضلة العضلة العضلية في المنطقة المصابة.
بدلا من ذلك ، لوحظ تسلل FAPs إيجابية PDGFRalpha.
