الفصل المغناطيسي للخلايا الجذعية CD34 ⁺ المقيمة في جدار الأوعية الدموية المعزولة من الشريان الأبهري للفأر والشرايين المساريقية لدراسات القلب والأوعية الدموية

للبدء ، عزل وزراعة الطبقة الخارجية من الشريان الأورطي والفرع الأول من الشرايين المساريقية المعزولة من الفأر المخدر. بمجرد أن تصبح الخلايا متقاربة بنسبة 80٪ ، قم بطرد مركزي تعليق الخلية المنفصلة عند 300 جرام لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة ، وتخلص من المادة الطافية تماما وأعد تعليق حبيبات الخلية في 98 ميكرولترا من المخزن المؤقت للفرز لكل 10 ملايين خلية إجمالية. بعد إضافة الجسم المضاد CD34 ، احتضان الخلايا في الظلام لمدة 30 دقيقة عند أربع درجات مئوية.

لغسل الخلايا ، أضف ملليلتر من المخزن المؤقت للفرز إلى الخلايا ، وأجهزة الطرد المركزي عند 300 جرام لمدة 10 دقائق. بعد التخلص من المادة الطافية ، أعد تعليق الخلايا في 80 ميكرولترا من المخزن المؤقت للفرز. ثم أضف 20 ميكرولترا من MicroBeads المضاد ل FITC إلى تعليق الخلية.

بعد غسل الخلايا وطردها المركزي كما هو موضح سابقا ، أعد تعليق الخلايا في ملليلتر واحد من المخزن المؤقت للفرز. بعد ذلك ، ضع عمود فصل مغناطيسي داخل المجال المغناطيسي للفاصل ، وضع أنبوب تجميع أسفل العمود. بعد الشطف ب 500 ميكرولتر من المخزن المؤقت ، قم بتحميل تعليق الخلية في العمود وجمع التدفق من خلال احتواء الخلايا غير المسماة في أنبوب التجميع.

قم بإزالة العمود من الفاصل وضعه على أنبوب طرد مركزي جديد سعة 15 ملليلتر. أدخل 500 ميكرولتر من المخزن المؤقت للفرز في العمود وادفع المكبس إلى العمود لطرد الخلايا ذات العلامات المغناطيسية.