للبدء ، قم بتركيب شريحة زجاجية نظيفة على غرفة الحمام التجريبية. قم بتغطية الشريحة باثنين إلى ثلاثة ميكرولتر من اللامينين واتركها تجف لمدة 30 ثانية. بعد ذلك ، صب ما يقرب من 400 ميكرولتر من تعليق الألياف العضلية على الشريحة واترك الألياف تلتصق باللامينين لمدة 10 إلى 15 دقيقة.
ضع الغرفة التجريبية على مرحلة المجهر المقلوب المجهز للتألق. للتحقق من صلاحية الألياف ، ضع قطبين من البلاتين على جانبي غرفة التجربة. بعد تطبيق نبضات التيار المستطيل لمدة 0.8 إلى 1.2 مللي ثانية ، لاحظ تقلصات الألياف العضلية في أقصى الحدود.
قم بتحميل الألياف ب 3.5 إلى 4.5 ميكرو من صبغة الكالسيوم السريعة Mag-Fluo-4 AM لمدة أربع إلى خمس دقائق في محلول Tyrode. بعد غسل الشريحة بمحلول Tyrode ، اترك الصبغة داخل الخلايا تزيل الأسترة لمدة 15 إلى 20 دقيقة في الظلام. أثناء الحصول على عابرات الكالسيوم تحت الإضاءة الخافتة ، قم بجمع وحفظ إشارات الضوء باستخدام هدف غمر الزيت 40X وأنبوب مضاعف ضوئي متصل بجهاز التحويل الرقمي.
في برنامج الاستحواذ ، تأكد من مقياس من صفر إلى 200 وحدة تعسفية. بعد ذلك ، اضبط حجم بقعة الإثارة وكسب أنبوب المضاعف الضوئي لضبط مضان الراحة ، أو F-rest ، على 10 وحدات عشوائية. لتحليل التسجيلات ، اضبط مرشح تمرير منخفض على التتبع بالكامل عند كيلو هرتز واحد.
بعد ذلك ، اضبط الذروة لحساب F-rest في ثانية واحدة من التتبع. اضبط F-rest على الصفر وقم بقياس سعة ذروة الكالسيوم العابر للساركوبلازم. قم بقياس وقت الارتفاع من 10٪ إلى 90٪ من السعة ، والمدة عند نصف الحد الأقصى ، ووقت الاضمحلال من 90٪ إلى 10٪ من السعة.
بعد ذلك ، قم بتقدير حركية الاضمحلال وفقا لتناسب الدالة الأسية الثنائية. احسب ذروة تركيز الكالسيوم في الميكرومولار. أخيرا ، احفظ قيم الثوابت الزمنية للاضمحلال tau 1 و tau 2 ، والسعات A1 و A2. أظهرت عضلات FDB و EDL حركية الكالسيوم المعروفة باسم مورفولوجيا النوع الثاني من عضلات Soleus التي أظهرت مورفولوجيا النوع الأول من الكالسيوم العابر.
تشترك الألياف من عضلات PDQA و PL و EHL في مورفولوجيا النوع الثاني. كانت الإشارات الحركية للكالسيوم العابر ل PDQA و PL و EHL مشابهة لإشارات عضلات FDB EDL ، ولكنها اختلفت عن إشارات العضلات الوحيدة.
