ابدأ بالحفاظ على خلايا TMPRSS2 HEK-293T ACE2 في DMEM تحتوي على FBS المنشط الساخن والبنسلين والستربتومايسين في دورق T75. لعد الخلايا ، امزج 20 ميكرولترا من تعليق الخلية مع 20 ميكرولترا من محلول Trypan Blue. أضف 20 ميكرولترا من معلق الخلايا المختلطة بالصبغة إلى غرفة عد الخلايا ، واحسب عدد الخلايا لكل ملليلتر.
البذور 2.5 في 10 أس أربع خلايا TMPRSS2 HEK-293T ACE2 في 50 ميكرولتر من وسط DMEM الكامل في كل بئر من صفيحة 96 بئرا. احتضان الخلايا في حاضنة ثاني أكسيد الكربون بين عشية وضحاها عند 37 درجة مئوية. في اليوم التالي ، استبدل 50 ميكرولترا من DMEM ب 50 ميكرولترا من تعليق الفيروس ، واحتضان لمدة 18 ساعة عند 37 درجة مئوية.
بعد الحضانة ، أضف 7.5 ميكرولتر من محلول تحلل الخلايا إلى كل بئر ، واخلطه على شاكر مداري لمدة دقيقتين. بمجرد تحليل الخلايا ، أضف محلول فحص لوسيفيراز اليراع الطازج ، واخلطها على شاكر مداري لمدة دقيقة واحدة. تحليل نشاط لوسيفيراز باستخدام قارئ لوحة لوسيفيراز الميكروية التجارية.
لتحييد مقايسة الأجسام المضادة ، قم بزرع خلايا HEK-293T في 50 ميكرولتر من DMEM الكامل كما هو موضح سابقا. في صفيحة 96 بئرا ، أضف ثمانية ميكرولترات من الجسم المضاد المعادل 27 BV ، وقم بإجراء التخفيفات التسلسلية بستة ميكرولترات من DMEM الخالي من المصل. أضف 54 ميكرولترا من جسيم فيروس Ha-CoV-2 إلى الجسم المضاد المخفف بشكل متسلسل ، وامزج التعليق.
احتضان لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية في 5 ٪ ثاني أكسيد الكربون. ثم أضف 50 ميكرولترا من تعليق الفيروس إلى الآبار التي تحتوي على خلايا HEK-293T. لعناصر التحكم ، أضف 50 ميكرولترا من وسط DMEM الكامل إلى الآبار التي تحتوي على خلايا HEK-293T فقط.
ضع اللوحة في حاضنة عند 37 درجة مئوية لمدة 18 ساعة. بعد تحليل الخلايا كما هو موضح سابقا ، أضف محلول فحص لوسيفيراز اليراع الطازج ، واخلطه عن طريق الاهتزاز المداري لمدة دقيقة واحدة. تحليل نشاط لوسيفيراز باستخدام قارئ لوحة لوسيفيراز الميكروية التجارية.
ولدت متغيرات Ha-CoV-2 Omicron و Omicron إشارة أعلى بأربعة إلى عشرة أضعاف من النوع البري Ha-CoV-2 ، مما يشير إلى ارتفاع العدوى. أظهر الجسم المضاد 27 BV نشاطا محايدا ضد كل من متغيرات دلتا وأوميكرون. كان ID50 البالغ 27 BV ل Omicron أقل قوة بحوالي 10 مرات من ID50 للنوع البري ودلتا.
