للبدء ، ابدأ تشغيل برنامج نظام تحليل الخلايا الحية. اضغط على رمز علامة الجمع في الزاوية العلوية اليسرى من الشاشة لبدء وعاء الإضافة. اختر المسح الضوئي حسب الجدول الزمني، ثم حدد جديد لتشغيل برنامج الفحص.
حدد قياسي. ثم قم بتعيين إعدادات المسح الضوئي كخيارات خلية تلو الأخرى إلى لا شيء وقنوات الصورة إلى المرحلة والأخضر والأحمر ، مع أوقات الاستحواذ المعنية. اضبط الهدف على 20x.
من القائمة ، اختر اللوحة وحدد موقع الوعاء لوضع اللوحة على درج نظام التصوير. حدد الآبار التي تحتوي على عينات وحدد عدد الصور المراد التقاطها لكل بئر. تقوم هذه المعلومات تلقائيا بإنشاء مدة مسح تقديرية للوحة.
انقر فوق إنشاء خريطة لوحة لإدخال معلومات لكل بئر، مثل نوع الخلية والمركب. ثم قم بتسمية الدراسة. في الشاشة التالية ، حدد Basic Analyzer كنوع التحليل واختر تعريف التحليل من القائمة المنسدلة ، والتي تعرض تعريفات التحليل المستخدمة مسبقا.
اترك فك الخلط الطيفي لكل من الأخضر والأحمر عند 0.0. حدد موعدا لإجراء الفحص كل 15 إلى 20 دقيقة لمدة ثماني ساعات. اسحب الشريط الأبيض والرمادي أعلى الشاشة لتعيين وقت بدء الفحص.
في الشاشة التالية ، راجع إعدادات المسح الضوئي ، واضغط على إضافة إلى الجدول لبدء المسح. بعد المسح ، في علامة التبويب عرض ، افتح الوعاء للتحليل. اضغط على تشغيل التحليل على يسار الشاشة وحدد إنشاء تعريف تحليل جديد.
اختر محلل أساسي واستخدم قنوات الصورة المرحلية، الخضراء، الحمراء، والمتداخلة. حدد ستة إلى ثمانية صور نموذجية تمثيلية للتدريب. لتكوين تعريف التحليل، قم بتعيين الكائنات الخضراء إلى العدلات التي تشكل مصائد العدلات خارج الخلية أو NETs، والكائنات الحمراء إلى نوى جميع العدلات.
اضغط على معاينة الحالية أو معاينة الكل واضبط كل معلمة لتحسين النتائج. اختر أوقات المسح والآبار للتحليل. ثم قم بتوفير تسمية لتعريف التحليل.
راجع الملخص وابدأ التحليل. بعد التحليل ، انقر نقرا مزدوجا فوق اسم تعريف التحليل لفتح الدراسة التي تم تحليلها. افتح الطبقات على يسار الشاشة وتحقق مما إذا تم تمييز كل خلية بشكل صحيح.
انقر على مقاييس الرسم البياني على يمين الشاشة، ثم حدد العدد لكل صورة للعدد الأخضر. اختر النقاط الزمنية والآبار المراد تصديرها. لتحديد التجميع ، حدد Plate Map Replicates للتأكد من تحديد جميع الآبار بشكل صحيح أثناء المسح ، وانقر فوق تصدير البيانات.
وبالمثل ، قم بتصدير البيانات للعد الأحمر وعدد التداخل. باستخدام المعادلة المعطاة ، احسب النسبة المئوية لخلايا تكوين NETs لكل شرط ونقطة زمنية. يتم تصور المسار الزمني لتشكيل NET عن طريق رسم النسبة المئوية للعدلات المكونة ل NET في كل نقطة زمنية.
أدت إضافة مثبط AKT إلى منع تكوين NET في العدلات المحفزة باستخدام PMA أو أيونات الكالسيوم. يمكن اختبار إظهار الجزيئات المحتملة التي تستهدف تكوين NET بطريقة إنتاجية عالية باستخدام هذه المنهجية.
