عزل الخلايا اللحمية من أنسجة الغدة الصعترية للفئران لتوليد مجموعات بيانات متعددة الخلايا أحادية الخلية عالية الجودة

للبدء ، ضع الماوس الرحيم على منصة جراحية وافتح تجويف الصدر. باستخدام المقص الجراحي ، قم بعمل شق عرضي أسفل القفص الصدري وقطع الأضلاع على كل جانب من جوانب الماوس إلى الترقوة. ثم قص الحجاب الحاجز لتحرير جدار الصدر ورفع الأضلاع بالملقط لفضح التجويف الصدري.

امسك الغدة الصعترية بالملقط ، واقطع النسيج الضام برفق لتثبيت الغدة الصعترية في مكانها. لإجراء التفكك الأنزيمي لأنسجة الغدة الصعترية للفأر ، ضع الغدة الصعترية النظيفة في غطاء أنبوب سعة 15 ملليلتر واستخدم مقصا جراحيا معقما لفرم الأنسجة بدقة. أضف ملليلتر من كوكتيل تفكك الفئران إلى الأنبوب.

قم بتوصيل الغطاء الذي يحتوي على قطع الغدة الصعترية واقلب الأنبوب خمس مرات لإعادة تعليق الأنسجة. لف غطاء الأنبوب في فيلم البارافين. بعد الحضانة ، ضع الأنبوب في رف واترك الأنسجة تستقر.

قم بإزالة المادة الطافية ومررها فوق مصفاة خلية 70 ميكرومتر في أنبوب بارد جليدي سعة 50 ملليلتر. ثم أضف 20 ملليلتر من M1 99 مع وسيط FBS 2٪ إلى تعليق الخلية. جهاز طرد مركزي الأنبوب عند 500 جرام لمدة خمس دقائق عند أربع درجات مئوية.

بعد التخلص من المادة الطافية ، أعد تعليق الحبيبات في وسط M1 99 و 2٪ FBS.