إجراء قياس التدفق الخلوي لقياس الرقم الهيدروجيني النسبي للجليكوسوم في المثقبيات الحية بروسي

للبدء ، ابدأ برنامج مقياس التدفق الخلوي. افتح تجربة جديدة. أضف العدد المطلوب من العينات وقم بتسميتها.

ثم قم بإعداد مدرج تكراري لقناة YL2-H أو RL1-H ، ومنطقة تشتت أمامية مقابل مخطط نقطي لمنطقة التشتت الجانبية ، ومنطقة تشتت أمامية مقابل مخطط نقطة ارتفاع التشتت الأمامي ومخطط نقطة قناة BL1-H مقابل VL2-H. ضع خلايا التحكم Trypanosoma brucei البرية غير الملوثة على منفذ حقن العينة ، واضبط موضع المرحلة. لتقليل حجم الملف ، قم بإلغاء تحديد القنوات التي لا يقصد تسجيلها.

ابدأ بمعدل تدفق منخفض للسماح بإجراء التعديلات. ثم انقر فوق تشغيل لبدء الحصول على البيانات. اضبط جهد YL2 أو RL1 لمحاذاة الذروة الرئيسية في حدود 10 إلى الثالثة إلى 10 إلى وحدات شدة التألق النسبية الرابعة.

اضبط جهد التشتت الأمامي والتشتت الجانبي لضمان أن أكثر من 90٪ من الأحداث تقع ضمن نطاق الرسم النقطي. اضبط عتبة التشتت الأمامي لاستبعاد الحطام دون حذف الخلايا القابلة للحياة. قم بتعديل إعدادات قناة VL 2 و BL 1 لوضع الذروة الأولية للتحكم في النوع البري غير الملوث في حدود 10 إلى اثنين إلى 10 إلى وحدات شدة التألق النسبية الرابعة.

انقر على تسجيل وقياس ما لا يقل عن 10000 حدث. ثم ضع أول عينة مستحثة من المثقبيات المعبرة عن pHluorin ملطخة إما بيوديد البروبيديوم أو ثيازول الأحمر على منفذ حقن العينة. مرة أخرى ، ابدأ في الحصول على البيانات بمعدل تدفق منخفض بعد إجراء الشطف.

راقب كل مخطط للتأكد من أن أكثر من 90٪ من الأحداث يتم التقاطها بشكل صحيح وأن قنوات VL2-H و BL1-H غير مشبعة. احفظ البيانات من كل عينة بتنسيق ملف FCS واستعد للتحليل.