للبدء ، قم بإجراء قياس التدفق الخلوي على خلايا المثقبية البروسية المعبرة عن الفلور. افتح تخطيطا جديدا ، واسحب ملفات FCS التي تم الحصول عليها وأفلتها في نافذة التخطيط. لبوابة الخلايا الحية، حدد عنصر التحكم من النوع البري غير الملوث لفتح نافذة.
تحليل البيانات باستخدام الرسوم البيانية على قناة YL2H أو RL2H. في هذه الحالة ، استخدم الرسم البياني YL2H لأن العينات كانت ملطخة بيوديد البروبيديوم. بعد ذلك ، قم بإنشاء بوابة ثنائية المنصف لفصل الخلايا الحية والميتة ، مع تسمية البوابة اليسرى على أنها حية والبوابة اليمنى على أنها ميتة.
تطبيق وضبط هذه البوابة عبر جميع العينات. تأكد من رسم البوابة بشكل صحيح من خلال عرض البوابة على عينات متعددة في مجموعة البيانات. في عنصر التحكم من النوع البري غير الملوث ، انقر نقرا مزدوجا فوق البوابة الحية.
اضبط المحور X للرسم النقطي على منطقة التشتت الأمامية، والمحور Y على منطقة التشتت الجانبي. ثم استخدم أداة بوابة المضلع لتحديد محتوى الخلية ، وتسميتها خلايا. استبعد الحطام أو الخلايا والركام المحتضرة من خلال توخي الحذر بشأن مواقعها النموذجية في المخطط النقطي.
قم بتطبيق بوابة الخلايا أسفل البوابة المباشرة لجميع العينات ، مع التأكد من أنها تغطي عدد الخلايا المحتمل لجميع العينات. انقر نقرا مزدوجا فوق بوابة الخلايا على عنصر التحكم من النوع البري غير الملوث لعرض الأحداث داخل هذه البوابة. لضبط الرسم النقطي، اضبط المحور X على منطقة التشتت الأمامية، والمحور Y على ارتفاع التشتت للأمام.
تحديد التوزيع القطري للخلايا المفردة على هذا المخطط النقطي ، وتمييزها عن الزوجي. استخدم أداة بوابة المضلع لتطويق الأحداث الفردية ، وتسمية مفردات البوابة هذه. قم بتطبيق بوابة المفردات أسفل بوابة الخلايا لجميع العينات، مع التأكد من أنها تستبعد الثنائيات أثناء تضمين المفردات، واضبط البوابة حسب الضرورة عبر عينات مختلفة.
في عينة التحكم من النوع البري غير الملوث ، انقر نقرا مزدوجا فوق بوابة المفردات. قم بتغيير المحور X للمخطط النقطي إلى BL1H ، والمحور Y إلى VL2H. باستخدام أداة بوابة المضلع ، ارسم بوابة قطرية لالتقاط خلايا الفلور -2 في VL2 و BL1.
قم بتسمية هذه البوابة على أنها إيجابية pHL. قم بتطبيق البوابة الموجبة pHL أسفل بوابة المفردات لجميع العينات. اضبط بوابة pHL لتغطية الخلايا ذات الكثافة الفلورية الأعلى من الخلايا الفلورية الذاتية في عنصر التحكم من النوع البري.
لتصدير الإحصائيات ، انقر فوق محرر الجدول ، ثم تحرير الشريط ، وأخيرا حدد إضافة عمود. قم بدمج أعمدة لإجمالي العدد غير المقيد ، والعدد الإيجابي ل pHL ، والتكرار المباشر للإجمالي ، والتردد الإيجابي pHl للأصل ، ومتوسط VL2H الإيجابي ل pHL ، ومتوسط BL1H الإيجابي pHL. لضبط إعدادات التصدير في محرر الجدول، اضبط العرض على ملف والنص على CSV.
حدد وجهة الملف واسمه، ثم انقر على إنشاء جدول. لوحظ تحمض خفيف تدريجي بمرور الوقت استجابة للمجاعة ، التي استقرت لمدة 90 دقيقة. بعد إعادة إدخال الجلوكوز كما هو موضح في الخط الأخضر ، عاد الرقم الهيدروجيني للجليكوزوم إلى مستويات ما قبل الجوع في 30 دقيقة ، مما يشير إلى أن درجة الحموضة الجليكوزومية ديناميكية وقابلة للتنظيم استجابة للجلوكوز.
