تحضير شرائح دماغ الفأر للتصوير بفاصل زمني لتحديد الديناميات الخلوية

للبدء ، احصل على الماوس الرحيم الذي يتم إعطاؤه باستخدام البلازميدات المناسبة. لإعداد طبق الثقافة ، أضف 1.9 ملليلتر من وسط الثقافة إلى طبق زجاجي وضع بعناية إدراج ثقافة الخلية عليه. ثم أضف 500 ميكرولتر من وسط الاستزراع على المرشح وضعه على الجليد.

قم بإزالة الأجنة ووضعها في طبق بتري يحتوي على برنامج تلفزيوني بارد مثلج. تحت المجهر ، حدد الأجنة بناء على التعبير عن بروتين الفلورسنت الأخضر أو علامات الفلورسنت الأخرى. بعد تشريح الدماغ ، ضعه في هلام الأغاروز المنصهر المأخوذ في قالب كريو ولفه عدة مرات.

بمجرد أن يصلب الأغاروز في درجة حرارة الغرفة ، ضعه على الجليد. باستخدام ميكروتوم اهتزازي ، قم بتقطيع الأدمغة إكليليا إلى سمك 350 ميكرومتر وترتيبها على الفلتر. ثم قم بإزالة 600 ميكرولتر من وسط الاستزراع من داخل وخارج كوب المرشح.

بعد خمس دقائق ، أضف 100 ميكرولتر من وسط الثقافة الطازجة إلى داخل ملحق زراعة الخلية. للتصوير بفاصل زمني ، احصل على صور مكدسة تبلغ حوالي 10Z باستخدام عدسة 20X لمسافة عمل طويلة. قدم تحليل صور الفاصل الزمني لدماغ الفأر مسارات الخلايا المهاجرة الإيجابية EGFP والخلايا المهاجرة الإيجابية RFP من ساعتين إلى 21 ساعة.