تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل وربط المحول للتسلسل المستهدف للكشف عن SNP متعدد الجينات في سرطان المعدة

للبدء ، خذ الأحماض النووية المستخرجة من عينات أنسجة سرطان المعدة المضمنة في البارافين. ضع مكونات مجموعة الكشف عن المفاصل متعددة الجينات لسرطان المعدة المصنوعة حسب الطلب على الجليد. بعد خلط المكونات جيدا ، قم بطردها لمدة 10 ثوان ، ثم أضف الكواشف إلى أنبوب PCR سعة 0.2 ملليلتر بالتتابع ، واخلطها لمدة خمس ثوان عن طريق الدوامة.

ضع كل أنبوب تفاعل على جهاز التدوير الحراري وقم بتشغيل برنامج التضخيم لعينات الحمض النووي ومنتجات cDNA. قم بإذابة إنزيم الهضم التمهيدي على الجليد. أضف ميكرولتر من إنزيم الهضم التمهيدي إلى كل أنبوب تفاعل.

بعد دوامية الأنابيب والطرد المركزي ، ضعها على جهاز الدورة الحرارية ، وقم بتشغيل برنامج الهضم. قم بإذابة المحول الذي يربط الكواشف على الجليد. قم بتسمية أنبوب طرد مركزي صغير سعة 1.5 ملليلتر على أنه خليط محول X وأضف المكونات المطلوبة.

خذ منتج التمهيدي المهضوم من جهاز التدوير الحراري. أضف كواشف الربط إلى الأنبوب ، دوامة لمدة خمس ثوان ، وأجهزة الطرد المركزي بسرعة منخفضة لمدة 10 ثوان عند 2،500 جم ، ثم ضع الأنبوب على جهاز الدورة الحرارية وقم بتشغيل برنامج التضخيم لعينات الحمض النووي ومنتجات cDNA.