للبدء ، قم بإجراء تصوير الفاصل الزمني للخلايا الليمفاوية التائية الحية المعزولة من الأنسجة اللمفاوية الثانوية للفئران. لتحليل ترحيل الخلايا التائية ، افتح برنامج السرعة وقم بإنشاء تسلسل صور جديد. حدد وانقل أفلام مجهر الفيديو ذات الفاصل الزمني إلى المنطقة الزرقاء في Velocity.
باستخدام أداة تحسين التباين ، قم بتعديل السطوع والتباين ، ثم اضبط أحجام الصور على 0.325 ميكرومتر لتكبير 20x و 0.65 ميكرومتر لتكبير 10x. بعد تكوين التسلسل لتعيين النقاط الزمنية ، انتقل إلى علامة التبويب القياس وقم بإلغاء تحديد جميع النقاط الزمنية. بعد ذلك ، ابحث عن الكائنات باستخدام الكثافة وحرك الشريط إلى يمين الذروة.
لتجنب حطام الخلايا ، استبعد جميع الخلايا التي يقل قطرها عن 10 ميكرومتر ويزيد قطرها عن 100 ميكرومتر. حدد تجاهل الكائنات الثابتة متبوعا بالانضمام تلقائيا إلى المسارات المعطلة. لحفظ بروتوكول جديد، انتقل إلى القياسات.
انقر فوق حفظ البروتوكول ، متبوعا باسم البروتوكول الجديد. في علامة التبويب القياس ، انقر فوق قياس جميع النقاط الزمنية وفرز المسارات حسب الفترة الزمنية من الأعلى إلى الأدنى. بعد تسجيل أرقام معرف المسار للخلايا ذات المسارات الجيدة ، قم بتصدير الملف كنص مفصول بفواصل ونقل البيانات إلى برنامج التحليل المطلوب.
لإجراء التتبع اليدوي ، افتح الصورة J ، وانتقل إلى المكونات الإضافية ، وحدد التتبع والتتبع اليدوي. قم بتعيين الفواصل الزمنية X بواسطة معايرة Y وحجم البكسل ومعايرة Z. بعد ذلك ، انقر فوق إضافة مسار لبدء تتبع الخلايا الفردية.
حدد خلية واحدة في النقطة الزمنية الأولى وتابعها خلال جميع النقاط الزمنية. أخيرا ، انقر فوق مسار النهاية. تتبع الخلايا بمساعدة البرامج ، تميز سلوكيات الهجرة للخلايا التائية الفردية المنشطة كما تدل عليها الخطوط الملونة المختلفة.
