تضمين أنسجة العين والتشريح بالتبريد في مركب درجة حرارة القطع الأمثل للتصوير الفلوري

بعد اكتمال الحماية بالتبريد لعين الأرنب ، قم بنقلها من محلول السكروز بنسبة 30٪ إلى طبق تشريح 100 ملم. تحت مجهر تشريح ، اقلب العين بعناية لإزالة محلول السكروز الزائد من الجزء الداخلي من العين. باستخدام منديل ، امسح محلول السكروز الزائد برفق من الجزء الخارجي من العين ، واملأ قالب تضمين يمكن التخلص منه بدرجة حرارة قطع مثالية أو مركب OCT على عمق 0.5 إلى سنتيمتر واحد.

ضع العين في قالب التضمين متجها لأعلى واملأ الجزء الداخلي من العين ببطء بمركب OCT ، وتجنب تكوين الفقاعة. بمجرد ظهور العين في مركب OCT ، ولا تلمس الأسطح الداخلية للقالب ، لف قالب التضمين في البارافين وقم بتخزينه عند أربع درجات مئوية طوال الليل. في اليوم التالي ، ضع قالب التضمين في طبق تشريح.

إذا أمكن ، قم بإزالة مركب OCT برفق من داخل العين بمسح. انقل العين إلى قالب تضمين جديد مليء بمركب OCT الطازج. ثم املأ القالب كما تم سابقا للتأكد من خلو وسيط التضمين النهائي من الحطام أو العيوب.

قم بتسمية القالب لأغراض التوجيه. ضع العين لأعلى في قالب التبريد ، بحيث يبطن مركب OCT الشبكية الداخلية. استخدم رأس العصب البصري كمعلم لتحديد الجزء العلوي من العين ضع قالب التضمين المسمى على الثلج الجاف ، مع التأكد من أن العين لا تلمس الأسطح الداخلية للعفن أو تتعرض للهواء.

قم بتركيب الكتلة على cryostat بحيث يكون الجزء العلوي من العين متجها لأعلى والجزء السفلي لأسفل. مع القرنية المتبقية والقزحية التي تواجه اليمين أو اليسار. ضع شفرة جديدة موازية للمحور الرأسي للعين لتقسيمها.

بعد قطع الأقسام والتجفيف طوال الليل ، ضع شريحة في الثلاجة عند 80 درجة مئوية. أظهرت الصور الفلورية لاستئصال الشبكية بالتبريد الكامل لعين الأرنب طبقة ظهارة صبغية موحدة مصطبغة في شبكية العين دون انفصال كبير عن طبقة مستقبلات الضوء المغطية. توضح صورة المجال الساطع لقسم الشبكية مورفولوجيا الشبكية السليمة لجميع الطبقات.