ابدأ بإجراء مقايسة MM QPCR لقياس طول التيلومير. ثم افتح البرنامج وحدد ميزة إعداد اللوحة. بعد ذلك ، اختر خيار عرض أو تحرير اللوحة من القائمة المنسدلة.
الآن تسليط الضوء على جميع الآبار على اللوحة. انقر فوق تحديد النباتات. حدد المربع المسمى cyber ، وتأكد من عدم تحديد جميع المربعات الأخرى.
ثم انقر فوق "موافق" للتأكيد. مع الحفاظ على تسليط الضوء على جميع الآبار ، حدد موقع المربع بجوار cyber وحدد ، بجوار تحميل الكلمات لتسمية جميع الآبار بالإنترنت. قم الآن بتمييز آبار التحكم الثلاثة غير النموذجية الموضوعة إما في أعلى أو أسفل التخفيف التسلسلي للتحكم القياسي.
ثم من قائمة نوع العينة على اليسار، حدد NTC. قم بتمييز الآبار ال 21 التي تشكل التخفيف التسلسلي للتحكم القياسي ، واختر قياسيا من قائمة نوع العينة. بينما لا تزال هذه الآبار محددة ، انقر فوق النسخ المتماثل التقني ، في قائمة حجم النسخ المتماثل ، اختر ثلاثة.
ثم حدد أفقي وانقر فوق تطبيق. بعد ذلك ، قم بالتمرير لأسفل إلى قسم سلسلة التخفيف وأدخل اثنين في حقل عامل التخفيف. بالنسبة للوحة P1 ، أدخل مرتين في 10 أس سالب ثلاثة في مجال تركيز البداية.
ثم حدد مربع التناقص وانقر فوق تطبيق لتأكيد الإعدادات. بالنسبة للوحة P2 ، أدخل 3.13 في 10 أس سالب خمسة في مجال تركيز البداية. تأكد من تحديد المربع للزيادة ثم حدد تطبيق لإنهاء الإعداد.
الآن قم بتمييز الأعمدة المقابلة لشريط PCR A من قائمة نوع العينة ، واختر غير معروف ، ثم تابع لتحديد النسخ المتماثل الفني. في قائمة حجم النسخ المتماثل ، اختر ثلاثة واختر أفقيا قبل النقر فوق تطبيق. انقر فوق موافق في أسفل يمين نافذة محرر اللوحة.
قم بتأكيد التغييرات بالنقر فوق نعم عند مطالبتك بذلك. بعد ذلك ، تحقق من أن المنحنيات في علامة تبويب القياس الكمي تبدو مناسبة لكل من الخطوة التاسعة والخطوة 12 ، وأن قيم الكفاءة بين هاتين الخطوتين لا تتباعد بأكثر من 10٪بالنسبة إلى P1 ، حدد الخطوة التاسعة وقم بتمييز 21 بئرا المقابلة للمنحنى القياسي. انسخ قيم CQ من الركن الأيمن السفلي من نافذة البرنامج.
ثم افتح قالب ورقة بيانات Telomere والصق هذه القيم في عمود الورقة الواحدة القياسي B.بعد ذلك ، أدخل قيمة ميل الخطوة التاسعة في الخلية C أربعة في الورقة الواحدة القياسية ، وتحقق من أن معامل الاختلاف لكل ثلاثية تخفيف قياسية أقل من 0.1. على CFX ، استبعد أي نقاط بيانات شاذة من التحليل تجعل مجموعة من ثلاث نسخ تقع خارج النطاق. الآن ، تأكد من أن آبار العينات البالغ عددها 72 فقط في ملف تحليل P1 مظللة باللون الأزرق في علامة التبويب القياس الكمي.
ثم في الخطوة التاسعة ، انسخ قيم CQ و SQ الموجودة في الركن الأيمن السفلي من نافذة البرنامج والصقها في ورقة العينات P1 بدءا من الخلية D3. باستخدام CFX maestro ، تأكد من أن جميع قيم CQ للعينات التحليلية تقع ضمن نطاق أدنى وأعلى قيم CQ للمنحنى القياسي. في ورقة Excel ، تحقق من أن تركيز البدء في NTC أقل من 5٪ من متوسط كمية الحمض النووي في آبار العينة. لمراقبة جودة مستوى العينة، افحص الانحرافات المعيارية ومعامل التغيرات في العمودين J وK على أوراق العينات P1 و P2.
تحقق من أن عينة السير الذاتية الفردية في ورقة P1 مقابل P2 ، وتحديدا في العمود G ، لا تتجاوز 0.05. إذا كانت السيرة الذاتية للعينة البينية أعلى من المقبول ، فقم بإزالة ما يصل إلى ثلاث نسخ واحدة من الحساب لكل عينة. لمراقبة جودة مستوى اللوحة، تحقق من أن متوسط التباين بين الألواح عبر جميع العينات على كل لوحة أقل من 0.05.
إذا كانت السيرة الذاتية للعينة البينية أعلى من المقبول ، فقم بإزالة ما يصل إلى ثلاث نسخ واحدة من الحساب لكل عينة. لمزيد من التحكم في جودة مستوى اللوحة ، تحقق من أن الاختلاف الكلي بين الألواح في ورقة P1 مقابل P2 أقل من 0.06.
