جمع السائل الدماغي الشوكي من الفئران المصابة بمرض Leptomeningeal لتوسيع الاستنساخ اللاحق

للبدء ، حدد الفئران NSG التي تعاني من نقص المناعة ، أو المصابة بمرض leptomeningeal ، أو LMD. ضع فأرا مخدرا على طاولة الجراحة. ضع أنف الفأر في مخروط معدل على شكل حرف L لجهاز تجسيمي ، مما يضمن بقاء الخياشيم دون عائق.

اسحب الجلد برفق للأمام عبر الأسطح البطنية لكل من الصيوان ، ثم ثبته على مخروط الأنف بشريط. قم بتوجيه أطراف المقص الجراحي لأسفل من الصيوان عبر العظم القذالي. قم بإنشاء شق صغير في خط الوسط بقياس خمسة إلى سبعة ملليمترات فوق التقعر المحسوس مباشرة.

مع زوج من الملقط ذو الرؤوس الحادة التي تحتوي على طرف واحد إلى اثنين من المليمترات ، اضغط برفق على الصهريج الكبير. أدخل الأطراف في وضع مغلق وافتحها أثناء ممارسة الضغط لأسفل على الجافية. استمر في إجراء تشريح حاد حتى يصبح الغشاء الجافية واضحا وتكون الأوعية الدموية المرتبطة مرئية داخل المنطقة المكشوفة.

الآن حافظ على الملقط مفتوحا لسحب العضلات المحيطة. ثم قم بتوصيل إبرة قياس 27 إلى 29 بحقنة ملليلتر واحدة. أدخل المحقنة أسفل الجافية لتصور شطبة.

تراجع تدريجيا المكبس حقنة لجمع أكبر قدر ممكن من السائل النخاعي. نقل السائل إلى أنبوب الطرد المركزي الدقيق. ضعه على الفور على الجليد.

أجهزة الطرد المركزي العينة عند 257 جم لمدة خمس دقائق عند أربع درجات مئوية. بعد استنشاق الطاف, ماصة 500 ميكرولتر من PBS معقمة إلى بيليه الخلية. أجهزة الطرد المركزي بيليه في 257 غرام لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة.

تخلص من المادة الطافية ، ثم انقل الحبيبات إلى لوحة 96 بئرا تحتوي على وسائط مكيفة من HMC.