عزل وتقطيع منطقة الحبل الشوكي القطني للفأر لتوليد شرائح نمطية عضوية لاختبارات العلاج التجديدي

للبدء ، احصل على المنطقة القطنية من العمود الفقري للجرو في طبق يحتوي على وسط تشريح بارد. باستخدام مجهر ستيريو تشريح ومقص ، وقطع العمود الفقري على طول المحور السهمي. باستخدام ملاقط مستقيمة ، قم بإزالة الحبل الشوكي برفق من تجويف العمود الفقري وقشر السحايا بعناية من منطقة أسفل الظهر المعزولة في الحبل الشوكي ، أو SC. نقل واحتضان منطقة أسفل الظهر SC المعزولة في وسط تشريح بارد وطازج لمدة 10 إلى 15 دقيقة.

باستخدام ماصة باستور بلاستيكية ، ضع المنديل على سطح القطع لأداة المروحية بشكل عمودي على الشفرة. بعد إزالة وسيط التشريح المتبقي ، تابع التقسيم الآلي ل SC. باستخدام ماصة باستور ، انقل الشرائح واحتضانها بوسط تشريح طازج في طبق 35 ملم لمدة 15 دقيقة. اغسل سطح غشاء الاستزراع ثلاث مرات باستخدام وسيط عضوي ، أو OM ، واترك ملليلترا واحدا من الوسائط في الجزء السفلي من إدخال الغشاء.

افحص الشرائح تحت مجهر ستيريو التشريح وقم بزرع العدد المطلوب من الشرائح على إدخالات الغشاء المشروطة. بعد ضبط اتجاه الشرائح وإزالة الوسط الزائد ، احتضانها عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. بعد ذلك ، انقل الملحق إلى طبق بتري جديد وأضف ملليلتر واحد من OM الطازج المكمل ب GDNF في الجزء السفلي من ملحق الغشاء.

احتضان الشرائح عند 37 درجة مئوية. في اليوم خارج الجسم الحي ، استبدل الوسيط القديم ب OM جديد. في اليوم الثالث ، قم بالتبديل إلى وسط الكسب غير المشروع المكمل ب GDNF ، وأضف GDNF الطازج إلى الوسط كل يوم حتى اليوم السابع خارج الجسم الحي. بالنسبة لبقية الزراعة طويلة الأجل ، أضف GDNF فقط عند تغيير الوسيط.

كشفت مقايسة التألق المناعي لشرائح النمط العضوي SC للفأر المستزرع على المدى الطويل عن توزيع واسع للخيوط العصبية للعلامة الهيكلية الخلوية والعلامة العصبية النووية RBFOX3 ، مما يشهد على حالتها الصحية وهويتها العصبية.