الكشف عن التعبير عن عوامل التغذية العصبية والنسخ في خلايا المجال الكهربائي النبضي النانوي (nsPEF) المحفزة RSC96

Please note that all translations are AI generated. Click here for the English version.

23 Views

•

02:55 min

•

May 3rd, 2024

DOI :

10.3791/201662-v

May 3rd, 2024

•

Jiahang Han*¹^,², Zewei Wang*¹^,², Yanzhao Dong*¹, Xiaodi Zou³, Haoyu Wang¹^,², Yonggang Chen¹, Sahar Ahmed Abdalbary⁴, Tian Tu⁵, Hui Lu¹

¹Department of Orthopedics, The First Affiliated Hospital, College of Medicine, Zhejiang University, ²College of Medicine, Zhejiang University, ³Department of Orthopedics, The Second Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medical University, ⁴Department of Orthopedic Physical Therapy, Faculty of Physical Therapy, Nahda University in Beni Suef, ⁵Plastic & Cosmetic Center, The First Affiliated Hospital, College of Medicine, Zhejiang University

* These authors contributed equally

Transcript

للبدء ، خذ خلايا RSC96 المحفزة كهربائيا في أطباق الثقافة. بعد ذلك ، استخدم قلم الأنسجة لرسم دوائر في المواقع التي يتم فيها توزيع الخلايا بالتساوي على قسيمة الغلاف. أضف 50 إلى 100 ميكرولتر من محلول عمل النفاذية إلى الخلايا واحتضانها في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة.

ثم اغسل الخلايا ثلاث مرات باستخدام برنامج تلفزيوني لمدة خمس دقائق لكل منها. بعد ذلك ، أضف 3٪ BSA داخل الدوائر لتغطية الأنسجة بشكل موحد واحتضانها في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. بعد ذلك ، قم بإزالة محلول الحجب برفق وأضف الجسم المضاد الأولي المخفف بشكل مناسب إلى الخلايا.

ضع صفيحة زراعة الخلايا في صندوق رطب واحتضانها طوال الليل عند أربع درجات مئوية. ثم اغسل الخلايا ثلاث مرات باستخدام برنامج تلفزيوني لمدة خمس دقائق لكل منها أثناء الرج باستمرار. أضف الجسم المضاد الثانوي المقابل واحتضانه في درجة حرارة الغرفة لمدة 50 دقيقة.

في نهاية الحضانة ، ضع قسيمة الغطاء في برنامج تلفزيوني واغسلها ثلاث مرات مع رجها لمدة خمس دقائق لكل منها. بعد ذلك ، اترك الشريحة تجف وأضف محلول تلطيخ DAPI إلى الشريحة المجففة. أخيرا ، أغلق انزلاق الغطاء المجفف بوسط تثبيت مضاد للبهتان من أجل التألق.

احصل على صور باستخدام أطوال موجية محددة للإثارة والانبعاث ل Alexa Fluor 488 و SCI3 و SCI5. أظهر التحليل المجهري خلايا موجبة ل S-100 بيتا السيتوبلازمية المتناثرة باللون الأحمر عبر جميع المجموعات ، ولوحظت زيادة الكثافة البصرية المتكاملة لمضان بيتا S-100 في مجموعة خمسة كيلوفولت لكل سنتيمتر مقارنة بالمجموعة الضابطة و 10 كيلوفولت لكل سنتيمتر. لوحظت خلايا GFAP و Sox10 الإيجابية مع السيتوبلازم المتناثر في جميع المجموعات أثناء فحوصات زحف الخلايا.

ومع ذلك ، كان تعبير GFAP أقل بكثير في مجموعة خمسة كيلوفولت لكل سنتيمتر مقارنة بمجموعات التحكم و 10 كيلوفولت لكل سنتيمتر. أظهرت خلايا RSC96 في مجموعة الخمسة كيلوفولت لكل سنتيمتر متوسط قيمة رمادية أعلى بكثير لتعبير Sox10 ، مما يشير إلى تعبير Sox10 محسن.

Explore More Videos

JoVE

From the series

تعزيز تجديد الأعصاب الطرفية بخلايا شوان المحفزة ب nsPEF