بعد جمع حزم الجاميتات من الخنثى المنوية من أنواع المرجان السيلوكوني، ضعها في أنابيب تحمل علامة 50 ملليلتر. ضع أربعة ميكرولترات من معلق المنوية المنشط في غرفة عد ماكلر. لتقييم حركة المنوية ، أضف تركيز العينة المنشطة.
افتح ملف ورقة البيانات التلقائية للبنوك الحيوية المرجانية وأدخل عامل تخفيف المنوية المستخدم في تقييم تحليل المنوية بمساعدة الكمبيوتر. بعد ذلك ، أدخل مخرجات تحليل المنوية بمساعدة الكمبيوتر لتركيز المنوية والحركة الكلية والحركة التدريجية. اكتب تركيز المنوية على أنبوب عينة المنوية المفلترة وانقل الأنبوب إلى محطة عمل الحفظ بالتبريد.
افتح ورقة البيانات التلقائية للبنوك الحيوية المرجانية المشتركة وحدد علامة التبويب الحفظ بالتبريد. بعد التحقق من ملصق أنبوب عينة المنوية ، حدد الإدخال المقابل عن طريق التحقق من معرف المستعمرة.باستخدام ماصة مصلية ، قم بقياس حجم عينة المنوية عن طريق سحبها وطردها مرة أخرى في نفس الأنبوب. أدخل القيمة في العمود E.تحقق من العمود المحسوب تلقائيا 1 لمعرفة تركيز المادة الواقية من البرودة المطلوب والعمود H لحجم المادة المخففة بالتبريد المراد إضافته.
بدء تشغيل جهاز توقيت. وباستخدام ماصة ، أضف قطرة DMSO المخففة بالتبريد مع خلط لطيف مستمر للعينة. سجل وقت الإصدار المخفف بالتبريد في العمود P.اقرأ العمود K لتحديد عدد قوارير التبريد المراد ملؤها.
قم بفك قوارير التبريد المعقمة ذات الباركود ، ورتب الأغطية على سطح معقم. باستخدام ماصة مصلية و pipeter aliquoting ، قسمة ملليلتر واحد من العينات في قوارير التبريد المشفرة وتلخيص القوارير. ضع قارورة مزدوجة حرارية واحدة وجميع قوارير العينات المملوءة في ملحق رف تبريد فارغ في درجة حرارة الغرفة.
بعد ذلك ، ضع قوارير التبريد الوهمية التي تحتوي على 10٪ DMSO في مياه البحر المفلترة في فتحات فارغة على رف التبريد. أدخل رقم التشغيل في العمود U من ورقة البيانات التلقائية وامسح الرقم التسلسلي لحامل التبريد ضوئيا في العمود V.ضع المؤشر في الخلية الصحيحة للعمود Z وامسح القارورة الحرارية ضوئيا ، متبوعا بجميع أنابيب قارورة التبريد. ضع الرفوف المحملة والممسوحة ضوئيا جانبا لبقية توازن المواد الواقية من التبريد.
املأ وعاء تبريد رف التبريد بالنيتروجين السائل إلى المستوى اللازم للتبريد عند حوالي 20 درجة مئوية في الدقيقة. بعد فترة توازن المواد الواقية من التبريد لمدة 10 دقائق ، قم بتوصيل المسبار المزدوج الحراري بمسجل البيانات وابدأ التسجيل. ضع رف التبريد الكامل برفق في وعاء التبريد وضع الغطاء.
سجل وقت البدء في العمود Q.بمجرد أن تشير القارورة الحرارية إلى 80 درجة مئوية أو أقل في مسجل البيانات ، انقل ملحق رف التبريد إلى حمام النيتروجين السائل لإخماد العينات. قم بإزالة قوارير التبريد من الرف ونقلها إلى شاحن جاف لنقلها إلى البنك الحيوي. في Acropora millepora ، أظهرت شرائح غرفة انزلاق الغطاء الثابت أقل من نصف عدد تركيز المنوية مقارنة بغرفة عد Makler.
أدى التحقق من صحة غرفة عد ماكلر مع ميكروبيدات اللاتكس المتاحة تجاريا بتركيز معروف إلى عمليات عد متسقة مع تباين منخفض ضمن النطاق المتوقع. لم يلاحظ فرق كبير في تركيزات ما بعد الذوبان للحيوانات المنوية الكلية أو المتحركة أو المتحركة تدريجيا في العينات المحفوظة بالتبريد باستخدام 20٪ أو 30٪ DMSO كمخفف بالتبريد.
