بروتوكول التلقيح المباشر (DIP) لتحديد البكتيريا باستخدام نظام آلي لتحديد الميكروبات واختبار الحساسية لمضادات الميكروبات (aMIAST)

للبدء ، قم بمسح الحاجز من زجاجة مزرعة دم آلية ، تحتوي على كائنات سالبة الجرام أحادية الشكل مع 70٪ كحول الأيزوبروبيل داخل خزانة السلامة الحيوية من الفئة 2A. ارسم خمسة ملليلتر من خليط مرق الدم في حقنة معقمة مزودة بإبرة قياس 21. بعد ذلك ، قم بتطهير الحاجز المطاطي لأنبوب فاصل المطاط.

نقل خليط مرق الدم إلى الأنبوب. أجهزة الطرد المركزي العينة في 160 غرام لمدة 10 دقائق. الآن ، قم بإخراج المادة الطافية بعناية داخل خزانة السلامة البيولوجية.

نقل المادة الطافية إلى قارورة جديدة لجمع الدم العادي. ضع القارورة المغطاة في جهاز طرد مركزي عند 2000 جرام لمدة 10 دقائق. الآن ، نضح الطافاح مع ماصة معقمة.

ثم قم بتوزيع ثلاثة ملليلتر من المحلول الملحي المعقم في أنبوب aMIAST مع زجاجة موزع. باستخدام حلقة تلقيح معقمة ، اختر الحبيبات البكتيرية من قاع القارورة وقم بتلقيحها في أنبوب aMIAST. استخدم محلول ملحي معقم ومقياس كثافة لضبط تعكر التعليق بين 0.47 و 0.63.

ثم ضع مرفقا شعريا لبطاقة تعريف aMIAST سالبة الجرام في الأنبوب الأول. ضع البطاقات المحددة بشكل مناسب على الدرج. الآن ، قم بتحميل الكاسيت في موضعه في حجرة الحشو بحيث يكون نموذج الرمز الشريطي متجها إلى الداخل.

أغلق الباب واضغط على تعبئة على شاشة واجهة المستخدم. عند اكتمال دورة التعبئة ، سيومض ضوء المؤشر الأزرق على النظام. الآن ، انقل الكاسيت من غرفة التعبئة إلى غرفة التحميل.

قم بإزالة نفايات الدرج عند اكتمال التحميل. الاستزراع الفرعي المعلق المتبقي في الأنابيب على أجار CLED للتحقق من نقاء العزلات. كانت نتائج سبع زجاجات مزرعة دم إيجابية ، تم تحديدها باستخدام بروتوكول التلقيح المباشر ، متضاربة حتى مستوى الأنواع.

من بين 105 من السلبيات الغرامية RAST التي يمكن الإبلاغ عنها والتي تم تحديدها بواسطة بروتوكول اللقاح القياسي ، تم تحديد 98 بشكل صحيح بواسطة بروتوكول التلقيح المباشر. من بين 99 سلبية غرام لا يمكن الإبلاغ عنها من RAST ، تم تحديد سالب غرام RAST الذي يمكن الإبلاغ عنه في أربع زجاجات مزرعة دم إيجابية.