هضم عضلات الهيكل العظمي والقلب للفأر لفرز الخلايا المنشطة بالتألق وزراعة السلف الليفي المنشأ (FAPs)

للبدء ، أضف ملليلتر من محلول الهضم إلى قنينة نقل سعة خمسة ملليلتر تحتوي على أنسجة قلب الفأر ، وأربعة ملليلتر من محلول الهضم في أنبوب طرد مركزي سعة 15 ملليلتر يحتوي على أنسجة الهيكل العظمي للفأر. ضع أنسجة عضلة القلب وعضلات الفخذ المعزولة من فأر شوكي على غطاء طبق بتري. باستخدام مقص الأنسجة ، قم بفرمه إلى قطع أصغر من ملليمتر مكعب واحد.

نقل الأنسجة المفرومة إلى أنابيب الهضم المعنية. دوامة محتويات الأنابيب لمدة ثانيتين بسرعة منخفضة. بعد 20 دقيقة ، قم بإزالة الأنابيب من المدور.

اسمح لقطع الأنسجة بالاستقرار. استخدم ماصة P 1000 لشفط المادة الطافية. نقل المادة الطافية إلى أنابيب طرد مركزي سعة 50 ملليلتر تحتوي على 20 ملليلتر من المخزن المؤقت FACS البارد الجليدي.

قم بتعبئة أنابيب الهضم بالأحجام الخاصة من المخزن المؤقت للهضم. احتضانهم على الدوار مرة أخرى. بعد إخضاع العضلات لجولة أخرى من الهضم ، أضف محلول FACS البارد لإخماد عملية الهضم.

ضع مصفاة خلية 40 ميكرومتر فوق أنبوب طرد مركزي سعة 50 ملليلتر. تصفية تعليق الهضم و supinate من خلال مصفاة. أجهزة الطرد المركزي تعليق الخلية عند 500 G لمدة ثماني دقائق عند أربع درجات مئوية.

بعد إزالة المادة الطافية ، أضف ثلاثة ملليلتر من المخزن المؤقت لتحلل ACK إلى الحبيبات وأعيد تثبيتها. احتضان التعليق لمدة خمس دقائق على الجليد. قم بتعبئة الحجم إلى 40 ملليلتر باستخدام المخزن المؤقت FACS.

أجهزة الطرد المركزي العينات مرة أخرى عند 500 جرام لمدة خمس دقائق عند أربع درجات مئوية. بعد صب المادة الطافية ، أعد تعليق الحبيبات في 0.5 ملليلتر من المخزن المؤقت FACS. أخيرا ، قم بتصفية التعليق من خلال غطاء مصفاة خلية 40 ميكرومتر ، يوضع على أنبوب سفلي دائري من البوليسترين سعة خمسة ملليلترات.