تشعيع ومعالجة عضويات الورم المشتقة من المريض لتقييم الحساسية الإشعاعية باستخدام التصوير الحي

للبدء ، احصل على عضوي الورم المشتق من المريض أو PDTO وأضف ثلاثة ملليلتر من وسط ثقافة DMEM F / 12 المخصب الطازج إلى PDTO كل ثلاثة إلى أربعة أيام. باستخدام منصة إشعاع أبحاث الصغيرة ، قم بإشعاع القباب المحتوية على PDTO في وضع المجال المفتوح. مباشرة بعد التشعيع ، اغسل كل PDTO يحتوي على قبة Nagrigel بملليلتر من وسط DMEM F / 12 المخصب.

ثم باستخدام P 1000 ، أعد تعليق PDTO في واحد إلى ثلاثة ملليلتر من إنزيم مؤتلف تم الحصول عليه تجاريا. نقل تعليق الخلية إلى أنبوب طرد مركزي 50 ملليلتر واحتضانها لمدة خمس دقائق عند 37 درجة مئوية. جهاز طرد مركزي الأنبوب لتكوير الخلايا ونضح المادة الطافية لترك ما يقرب من ملليلتر واحد من الإنزيم المؤتلف في الأنبوب.

ثم اغسل الخلايا بوسط DMEM F / 12 المخصب وقم بتصفية تعليق الخلية في مرشح شبكي 40 ميكرومتر للتخلص من مجموعات الخلايا ، وقم بتلطيخ عينة صغيرة من الخلايا المفلترة باللون الأزرق 10٪ في PBS وعدها في عداد الخلايا الآلي. أعد تعليق الخلايا لتحقيق كثافة 800 خلية في 50 ميكرولتر من الوسط المخصب بنسبة 66٪ magrigel. اللوحة التالية ، كل قبة في آبار منفصلة للوحة 48 بئر متوافقة مع التصوير واحتضان اللوحة للسماح للماجريجيل بالتصلب.

أخيرا ، أضف 0.5 إلى ملليلتر واحد من وسط DMEM F / 12 المخصب إلى كل بئر للتصوير الحي.