للبدء ، استخدم ملعقة مبردة مسبقا لإضافة 100 ملليغرام من مسحوق الأنسجة النباتية إلى أنبوب طرد مركزي دقيق من مادة البولي بروبيلين متدرجة. ثم أضف على الفور ملليلتر واحد من الميثانول 20 ٪ إلى الأنبوب. ضع الأنبوب المغطى على شاكر هزاز لمدة ثلاث ساعات في درجة حرارة الغرفة.
بعد ذلك ، قم بطرد الأنبوب عند 9،464 جم لمدة 10 دقائق ، وجمع المادة الطافية في قارورة أخذ العينات الأوتوماتيكية LC-MS. قم بإعداد أداة LC-MS مع مصدر تأين بالرش الكهربائي وعمود HPLC عكسي الطور. بالنسبة ل HPLC ، استخدم 0.1٪ حمض الفورميك في الماء كمذيب A و 0.1٪ حمض الفورميك في الأسيتونيتريل كمذيب ب- اضبط درجة حرارة فرن العمود على 45 درجة مئوية ومعدل التدفق إلى 0.5 ملليلتر في الدقيقة.
قم بموازنة العمود مع 99٪ A و 1٪ B. قم بإعداد تدرج مدته 30 دقيقة لتركيز المذيب B لزيادة من 1٪ إلى 50٪ خلال 26 دقيقة ، ثم العودة بسرعة إلى 1٪ B في 26.01 دقيقة واستمر لمدة أربع دقائق. تكوين معلمات تشغيل مطياف الكتلة.
اضبط جهد الواجهة على أربعة كيلوفولت ، وتدفق غاز البخاخات على ثلاثة لترات في الدقيقة ، وتدفق غاز التسخين على 10 لترات في الدقيقة. اضبط درجة حرارة خط الذوبان على 250 درجة مئوية ، ودرجة حرارة كتلة الحرارة إلى 400 درجة مئوية ، ودرجة حرارة الواجهة إلى 300 درجة مئوية. اضبط تدفق غاز التجفيف على 10 لترات في الدقيقة وضغط غاز التفكك الناجم عن الاصطدام على 17 كيلو باسكال.
بناء طريقة MS في الوضع الإيجابي لمصدر التأين بالرش الكهربائي ، بما في ذلك كل من عمليات المسح Q3 و Q1 التي تغطي نطاق الكتلة من 100 إلى 1،000 دالتون مع مسح Q1 بمثابة حدث مسح مع استبعاد تلقائي للنظائر. أضف رابط المسح الأيوني للمنتج إلى فحص Q1 مع نافذة كتلة من 50 إلى 1000 دالتون ، وطاقة خلية تصادم سالب 20 فولت ، ووقت حدث أقل من 0.2 ثانية. بعد ذلك ، اضبط طريقة MS لإضافة مسح أيون السلائف في الوضع الإيجابي يساوي طول طريقة LC مع طاقات خلايا التصادم التي تقل عن 20 فولت وأوقات الأحداث 0.75 ثانية.
تأكد من أنه في جميع الحالات ، يتم تمكين وظائف استبعاد النظائر أو إزالة النظائر التلقائية. اضبط قيم الشحنة الرئيسية لشظايا قلويدات التروبان أحادية الاستبدال، ثنائية الاستبدال، وثلاثية الاستبدال. بعد ذلك ، إلى طريقة MS-MS ، أضف عمليات مسح الخسارة المحايدة في الوضع الإيجابي التي تساوي طول طريقة LC مع طاقات خلايا التصادم التي تقل عن 20 فولت وأوقات الأحداث 0.75 ثانية.
تأكد من أنه في جميع الحالات ، يتم تمكين وظائف استبعاد النظائر أو إزالة النظائر تلقائيا. قم بإعداد كتل الفقد المحايدة ذات الأهمية للإسترات على قلويدات التروبان للإسترات المشتقة من حمض tiglic ومجموعات الأسيتيل واسترات حمض الفينيل أو حمض المدار. قم بتنزيل طريقة LC-MS وإنشاء ملفات بيانات للعينات ذات الأهمية.
بمجرد موازنة عمود HPLC عند 45 درجة مئوية ، قم بحقن 10 إلى 20 ميكرولترا من العينة.
