استخراج قلب جنين الفأر وتثقيبه كهربائيا كنهج وراثي

للبدء ، استخدم مجتذب ماصة لتمديد شعرية زجاجية بعرض 20 ميكرومتر. ضع رحم الفأر المستخرج على منشفة ورقية جافة. ثم ، أدخل طرف مقص ناعم في الجانب العضلي من الرحم ، وقم بتشغيل حافة الشفرة ببطء طوال الطول وقطعها.

الآن ، فضح وقطع decidui. نقلها إلى طبق مع متوسط النمو. تشريح decidui لاستخراج الأجنة.

نقل الأجنة إلى طبق بتري 60 ملم يحتوي على وسط نمو دافئ. مع زوج من ملقط غرامة ، وقطع بعناية الذيل ورأس الجنين ، وترك فقط جذع الجسم. قم بإزالة أكبر قدر ممكن من الأنسجة بعناية من الجذع دون الإضرار بالقلب أو الشرايين الرئوية والشريان الأورطي.

أدخل إبرة جديدة ممدودة في طرف ماصة الفم ، وقم بنضح بعناية وتحميل 10 ميكرولتر من مزيج البلازميد المحضر في الإبرة الممدودة. ضع قلبا واحدا في طبق بتري نظيف 60 ملم يحتوي على برنامج تلفزيوني مسخن مسبقا. ضع الطبق تحت مجهر تشريح.

اضبط المسافة بين قطبي الأقطاب الموجبة والسالبة على حوالي أربعة ملليمترات. بعد ذلك ، استخدم إبرة في ماصة الفم لثقب الطبقة الأكثر سطحية من القلب برفق. نقل واحد إلى اثنين ميكرولتر من مزيج البلازميد في القلب.

قم بإزالة الإبرة بعناية. ثبت القطب في مكانه بحيث يقع القلب بين القطبين. ثم قم بإلكتروبور القلب.

انقل القلب المكهرب إلى صفيحة بئر جديدة مكونة من 12 بئرا تحتوي على ملليلتر واحد من وسط النمو. احتضان اللوحة عند 37 درجة مئوية تحت 5٪ ثاني أكسيد الكربون حتى التحليل.