دمج البنية الموجودة في ^{سلالة الرو الاصطناعية} في جينوم الخميرة الميتوكوندريا عن طريق التحفيز الخلوي

للبدء ، قم بتلقيح أنبوبين يحتويان على ثلاثة ملليلتر من وسائط YPD بخلايا الرو ناقص الاصطناعية وخلايا الخميرة المستقبلة. في اليوم التالي ، انقل 750 ميكرولترا من سلالة المتبرع و 250 ميكرولترا من سلالة المستقبلات إلى أنبوب دقيق معقم. بعد طرد الخليط بالطرد المركزي لمدة دقيقة واحدة عند 13،200 جرام ، انقل قطرة من حبيبات الخلية إلى لوحة YPD واحتضنها.

تحقق من الثقافة تحت المجهر الضوئي لوجود شموس. في حالة وجود شموس ، أعد تعليق كمية صغيرة من كتلة الخلية في ملليلتر من وسط YPD. احتضان الثقافة لمدة ساعتين عند 30 درجة مئوية في عجلة دوارة.

دوامة الخليط جيدا. ثم تمييع 10 ميكرولتر من تعليق الخلية في 990 ميكرولتر من الماء المعقم. انشر 100 ميكرولتر من الثقافة المخففة على وسط تسرب يسهل نمو سلالة المتقبل فقط.

قم بتكرار المستعمرات الناتجة على الوسائط الانتقائية اللازمة. بعد تحديد المستعمرات الإيجابية ، أعد ربطها على نفس الوسائط الانتقائية لتنقية السلالة الأحادية الصيغة الصبغية التي تحمل الحمض النووي للميتوكوندريا محل الاهتمام.