تطوير الخلايا التائية ذات مستقبلات المستضدات الوهمية المستجيبة لنقص الأكسجة عن طريق نقل الفيروسات العدسية

للبدء ، ضع قارورة من خلايا الدم البشرية أحادية النواة المحفوظة بالتبريد في حمام مائي عند 37 درجة مئوية. بمجرد إذابته ، انقل تعليق PBMC إلى أنبوب سعة 15 ملليلتر يحتوي على تسعة ملليلتر من TGM. جهاز طرد مركزي الأنبوب عند 300 G لمدة خمس دقائق بعد سحب حصة من تعليق الخلية للعد.

أعد تعليق PBMC المحبب في ثلاثة ملليلتر من TGM. بعد ذلك ، قم بنقل الحجم المطلوب من تعليق الخلية إلى لوحة ستة آبار. في اليوم السابق لإنعاش الخلية ، انقل 100 ميكرولتر من حبات الغلوبولين المناعي G المغناطيسية للفأر إلى أنبوب طرد مركزي صغير سعة 1.5 ملليلتر.

أضف ملليلتر واحد PBS إلى الأنابيب وضعها على حامل مغناطيسي لغسل الخرز. أعد تعليق الخرز في 100 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني. ثم أضف الأجسام المضادة إلى التعليق.

استخدم ماصة لخلط التعليق جيدا برفق. ضع التعليق على الروك عند أربع درجات مئوية طوال الليل. بعد غسل الخرز في برنامج تلفزيوني كما حدث سابقا ، أعد تعليقها في 100 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني.

أضف الآن حبات المناعة المغلفة NHCD3 hCD28 إلى اللوحة واحتضانها. بعد 48 ساعة من الحضانة ، قم بخلط ونقل تعليق الخلية إلى أنبوب طرد مركزي سعة 15 ملليلتر. ضع الأنبوب على حامل مغناطيسي لمدة ثلاث دقائق.

ثم نقل طاف في أنبوب جديد 15 ملليلتر. بذر خمسة في 10 أس خمسة PBMC في 300 ميكرولتر من TGM في آبار صفيحة مسطحة 48 بئرا. ماصة 200 ميكرولتر من مخزون عدسي فيروسي في الآبار المقابلة.

ثم أضف كبريتات البروتامين إلى تركيز نهائي قدره 10 ميكروغرام لكل ملليلتر قبل الطرد المركزي. ماصة من 300 ميكرولتر من المادة الطافية من كل بئر ، ثم أضف ملليلتر واحد من TGM الطازج في كل بئر. ضع اللوحة في حاضنة مرطبة عند 37 درجة مئوية تحت 5٪ ثاني أكسيد الكربون.

أضف 0.5 إلى 2 ملليلتر TGM طازجة إلى الطبق كل يومين إلى ثلاثة أيام. ثم انقل الخلايا إلى صفيحة بئر 12 ، تليها صفيحة ستة آبار حتى تصل الكثافة الكلية للخلية إلى 6 ملايين في حجم أربعة ملليلترات.