تحليل غير متحيز للتغيرات في الأوعية الدموية الدقيقة في فصيصات رئة الفئران الملطخة بالإيسولكتين B4 باستخدام ImageJ

للبدء ، احصل على أقسام أنسجة رئة الفأر الملطخة ب Isolectin B4 أو IB4 و DAPI. احصل على صور تحت المجهر الفلوري بهدف 10x. قم باستيراد الصور إلى برنامج ImageJ وحددها.

قم بتقسيم القنوات وفقا لذلك وقم بتحميل الملف بتنسيق ND2 لقنوات DAPI و IB4. انتقل إلى التحليل وتعيين المقياس. قم بتكوين معلمات الصورة، ثم حدد عمومي، متبوعا بتعيين نفس نطاق OK.To العرض، انتقل إلى الصورة، واضبط تباين السطوع، ثم انقر فوق تعيين.

قم بتعيين نطاق العرض ل IB4 على أنه صفر إلى 10,000، ونطاق العرض ل DAPI على أنه صفر إلى 20,000. لإزالة الخلفية، انقر فوق معالجة، متبوعا بالرياضيات. اطرح إشارة الخلفية بناء على القيم التي تم اكتشافها بواسطة أداة العصا السحرية في الخلفية.

لتحديد أفضل قيمة حد، انتقل إلى صورة وانقر فوق تكرار. حدد كل من نوع الصورة الأصلية والصورة المكررة إلى 8 بت. بعد ذلك ، ضمن علامة التبويب صورة ، حدد ضبط متبوعا ب Threshold و Enter Modes.

بعد اختيار الحد الأكثر واقعية ، حدد الخلفية الداكنة وقم بتطبيقه. باستخدام أداة العصا السحرية ، حدد الأوعية الدموية الأكبر مقارنة بالصورة المكررة ، ثم انقر فوق حذف للتخلص من الإشارات الإيجابية ل IB4 من الشرايين والأوردة الكبيرة. لحساب عدد الإشارات المستهدفة، انقر على تحليل، متبوعا بتعيين القياسات، وحدد المنطقة والحد إلى الحد وعرض التسمية.

ثم حدد تحليل الجسيمات وتعديل الحجم من صفر إلى ما لا نهاية، ودائرية من صفر إلى واحد، وإظهار كأقنعة تراكب. ضع علامة على تلخيص، ثم انقر فوق موافق. أخيرا ، اختر الملخص. انقر فوق ملف واحفظ النتائج.

يمكن تمييز النسبة المئوية للبؤر الإيجابية ل IB4 في فصوص الرئة القحفية والوسطى والذيلية والملحقة واليسرى بين الفئران الصغيرة والمتوسطة العمر باستخدام تحليل ImageJ.