للبدء ، احصل على خلايا سرطان الدم المزروعة في ظل الظروف المثلى للزراعة. بعد عد الخلايا ، قم بتكسيرها على 300 جرام لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة وتخلص من المادة الطافية. بالنسبة لتلطيخ CM-Dil ، أعد تعليق الخلايا في محلول العمل للحصول على واحد في 10 إلى قوة ست خلايا في 100 ميكرولتر واحتضانها عند 37 درجة مئوية لمدة 10 دقائق.
اغسل الخلايا مرتين ب 10 ملليلتر من 1X HBSS في درجة حرارة الغرفة. بعد تكوير الخلايا عند 300 جرام لمدة خمس دقائق ، أعد تعليقها في PBS تحتوي على 1٪ FBS لتحقيق كثافة 40،000 خلية لكل ميكرولتر. ثم قم بتشغيل الحاقن الصغير والمضخة.
اضبط ضغط الحقن على تسعة إلى 11 رطلا لكل بوصة مربعة ، وفي وقت الحقن على 0.5 ثانية لقص الإبرة ووضع الفتحة. قم بتحميل حوالي خمسة ميكرولترات من خط تعليق الخلايا السرطانية في الإبرة الدقيقة بعناية ، في مسار واحد ، وتجنب تكوين فقاعة الهواء. باستخدام ملقط Dumont 5 ، اقطع نهاية الإبرة لإنتاج فتحة يمكنها دعم الطرد.
ثم حدد أجنة الزرد الصحية تحت المجهر ، والقضاء على أي حالات شاذة في النمو. باستخدام ماصة باستور الزجاجية ، التقط الأجنة المخدرة ورتب 10 إلى 15 منها في وضع جانبي على صفيحة الأغاروز 1.5٪. قم بإزالة الماء الزائد لترك الحد الأدنى من الكمية لبقاء الجنين.
بعد ذلك ، تأكد تحت المجهر الضوئي من أن الإبرة مقطوعة جيدا وتحتوي على خلايا. حقن 10 إلى 15 نانولترا المقابلة ل 400 إلى 600 خلية في صفار الأجنة لمدة 0.2 إلى 0.3 ثانية. بعد حقن جميع الأجنة ، قم بجمعها في ماء الجنين النقي.
بعد ساعة واحدة من الحقن ، راقب بلعة الخلايا لفصل الأجنة ذات التلوين الأمثل أو البلعة الجيدة عن تلك التي لديها تلطيخ رديء أو بلعة رديئة. مكن تلطيخ CM-Dil وعلامات البروتين الفلوري من مراقبة تطور المرض عن طريق الفحص المجهري. وانخفض بقاء الأجنة بعد الحقن بخطين متميزين وراثيا لسرطان الدم.
