للبدء ، قم بإعداد ووضع الفئران المخدرة للفيزيولوجيا الكهربية. تطبيق نبضات الموجات المربعة أحادية الطور لتحفيز العصب الحجابي لتسجيل استجابات CMAP. زيادة شدة التحفيز تدريجيا حتى تتوقف سعة الاستجابة عن الزيادة.
بعد ذلك ، ارفع شدة التحفيز إلى حوالي 120٪ من المستوى المطلوب للاستجابة القصوى لضمان التحفيز الأقصى الفائق وتسجيل استجابة إضافية. قم بقياس وتوثيق السعات من الذروة إلى الذروة ل CMAP بالمللي فولت. تطبيق التحفيز دون الحد الأقصى لمدة 0.1 مللي ثانية بتردد 1 هرتز.
قم بزيادة الشدة تدريجيا بزيادات قدرها 0.03 مللي أمبير لاستنباط استجابات تدريجية حتى يتم تحقيق الحد الأدنى من الاستجابة الكاملة أو لا شيء. بعد ذلك ، احصل على الاستجابة الأولية بكثافة تحفيز تتراوح بين 2 و 10 مللي أمبير. بعد حفظ الاستجابة الإضافية الأولى ، احصل على زيادات إضافية ذات شدة تحفيز أعلى تدريجيا بزيادات قدرها 0.03 مللي أمبير.
تأكد من أن الذروة السلبية الأولية للاستجابات الإضافية تتماشى مؤقتا مع الذروة السلبية لاستجابة CMAP القصوى. بالنظر إلى مشاركة الحجاب الحاجز في التنفس، تحقق من الاستقرار وعدم وجود تجزئة في كل استجابة تدريجية للتأكد من الاتساق عبر ثلاث استجابات مزدوجة. راقب الاستجابات المتزايدة في الوقت الفعلي وقم بتراكبها على التسجيلات السابقة للتمييز البصري.
ثم تأكد من أن سعة الزيادة لا تقل عن 25 ميكروفولت. بعد تسجيل 10 استجابات تزايدية ، تحقق من أن سعة كل زيادة لا تتجاوز 1/3rd من السعة الإجمالية للاستجابة النهائية. لتقدير متوسط سعة SMUP ، قم بحساب متوسط قيم 10 زيادة.
بعد ذلك ، قسم الحد الأقصى لسعة CMAP على متوسط سعة SMUP لتحديد MUNE. بعد سبعة أيام من حقن CTB-SAP داخل الجنبة ، انخفض MUNE إلى 60 وحدة حركية وظيفية في الفئران البالغة مقارنة ب 74 في الفئران الضابطة. ظلت سعة CMAP مستقرة نسبيا ، مما يشير إلى ظهور الضمانات كآلية تعويضية محتملة.
تم قياس الحجاب الحاجز CMAP و SMUP و MUNE على مدار 28 يوما بعد الحقن. لم يظهر CMAP أي تغيير ملحوظ. كان متوسط الزيادة في SMUP لفئران CTB-SAP حوالي 50 إلى 60٪ كانت التغييرات كبيرة بمرور الوقت وتعزى إلى CTB-SAP.
تم تخفيض MUNE بنسبة 40٪ تقريبا في فئران CTB-SAP ، مما يشير إلى تأثيرات كبيرة للوقت في علاج CTB-SAP.