حقن Hoechst داخل الكاميرا لتقييم التوافر البيولوجي للصبغة في طبقة الخلايا البطانية القرنية

للبدء ، قم بتحميل خمسة ميكرولترات من محلول hoechst في حقنة زجاجية معقمة سعة 10 ميكرولتر من هاملتون ، متصلة بإبرة حادة قياس 34. أدخل إبرة المحقنة هذه في الغرفة الأمامية من خلال نفق القرنية ذاتي الغلق ، وحقن المحلول. أمسك الإبرة في مكانها لمدة ثانيتين إلى ثلاث ثوان، حتى يزول كل السائل.

اسحب الإبرة ببطء لإزالتها ، وتجنب التسرب. بعد ذلك ، استئصال كلتا العينين. لعزل القرنيات ، قم بقطع الصلبة حول العصب البصري ، وقم بعمل أربع جروح إضافية من العصب البصري باتجاه القرنية.

قم بتصريف السوائل الزائدة باستخدام ورق الترشيح Whatman. انشر الصلبة المقطوعة ، وافصل الشبكية عن الصلبة. اسحب العدسة وشبكية العين وتخلص منها.

بعد ذلك ، قم بإزالة القزحية. قطع وتخلص من الصلبة حول القرنية. وارفع القرنية بعناية.

ضع القرنيات على شريحة زجاجية ، وصخها ب 0.5٪ أليزارين الأحمر لتحديد الخلايا البطانية. بعد إزالة البقعة الزائدة ، اغسل القرنية ثلاث مرات ، وضع غطاء عليها. افحص القرنيات تحت المجهر الضوئي لتصوير تلطيخ أليزارين الأحمر للخلايا البطانية.

أيضا ، قم بتقييم القرنيات تحت المجهر الفلوري لمراقبة تلطيخ الأحجار ، ومقارنتها بالقرنية غير المحقونة كمراقبة. تم استخدام صبغة Hoechst ، وهي علامة فلورية نفاذة لخلية ربط الحمض النووي ، لتقييم التوافر البيولوجي للأدوية من خلال الحقن داخل الكاميرا. تم فحص امتصاص الخلايا البطانية القرنية بعد 15 دقيقة من الحقن بواسطة الفحص المجهري الفلوري.

سلط تلطيخ أليزارين الأحمر الضوء على الحدود بين الخلايا للطبقة البطانية. أيضا ، أكد تلطيخ الإيجابي داخل نوى الخلايا البطانية للقرنية التوصيل الناجح للصبغة عبر هذه الطريقة.